[发明专利]重组载体、转化体、用于扩增AtNAC58基因的引物及其制备方法和应用

说明书

本申请提供一种植物组织培养的方法，所述方法使用AtNAC58基因转化体促进植物组织快速分化，本申请提供的方法能够打破传统方案对外植体选材限制，能够使用较为成熟的植物材料作为外植体，并且，能够缩短植物组织分化时间，从而降低植物组织培养的难度，提高植物组织培养的成功率和效率。

技术领域

本申请属于生物技术领域，特别涉及一种用于扩增AtNAC58基因的引物、AtNAC58重组载体、AtNAC58转化体及其制备方法和应用。

背景技术

植物组织培养是通过无菌操作，将离体的外植体接种于人工配制的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。植物组织培养是20世纪初以植物生理学为基础发展起来的植物细胞工程技术，是农业技术中最重要、最活跃的领域之一，它不仅是农业持续发展的基础，而且是生物技术中应用最广、最具现实意义的领域，被誉为农业发展史上的第四次绿色革命，其对解决农业资源匮乏、环境污染等重大问题，具有战略意义。

植物组织培养的选材非常重要，影响植物组织培养能否成功以及效率。由于其再生能力强，代谢旺盛较容易脱分化培养，通常，选取幼嫩的组织部位作为植物组织培养的外植体。但是，很多时候，由于种种原因限制难以获得植物的幼嫩组织，而且，对幼嫩组织往往较为脆弱，在被损伤后常会死亡，这都导致组织培养的成功率低。

此外，现有技术进行组织培养的分化时间至少需要一个月，使得组织培养的效率较为低下。

发明内容

为解决上述问题，本申请提供一种植物组织培养的方法，所述方法使用AtNAC58基因转化体促进植物组织快速分化，本申请提供的方法能够打破传统方案对外植体选材限制，能够使用较为成熟的植物材料作为外植体，并且，能够缩短植物组织分化时间，从而降低植物组织培养的难度，提高植物组织培养的成功率和效率。

本申请的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本申请提供一种AtNAC58基因，所述AtNAC58基因可以通过人工合成方法进行合成，也可以从拟南芥植物体中提取，进一步地，获得所述AtNAC58基因后还可以通过PCR方法克隆。

在本申请中，所述AtNAC58基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

第二方面，本申请还提供一组用于扩增所述AtNAC58基因的引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物，其中，正向引物的序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的序列如SEQID NO.3所示。

第三方面，本申请还提供一种AtNAC58重组载体，所述AtNAC58重组载体包括所述AtNAC58基因。

可选地，所述AtNAC58重组载体中使用的载体为pCanG载体。

第四方面，本申请还提供一种AtNAC58转化体，所述AtNAC58转化体包括所述AtNAC58基因。

可选地，所述AtNAC58转化体采用的宿主为农杆菌。

第五方面，本申请还提供所述AtNAC58基因用于植物组织培养的用途。

第六方面，本申请还提供第三方面所述AtNAC58重组载体用于植物组织培养的用途。

第七方面，本申请还提供第四方面所述AtNAC58转化体用于植物组织培养的用途。

可选地，所述转化体直接转染植物组织，能够促进外植体的植物组织分化。

进一步地，所述转化体直接转染植物组织的时间为10min。

第八方面，本申请提供一种所述AtNAC58基因的制备方法，所述方法包括人工合成法以及生物克隆法。

在一种可实现的方式中，所述人工合成法可采用现有技术中任意一种根据已知序列合成基因的方法。