[发明专利]肠癌原代细胞的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种肠癌原代细胞培养基，其特征在于，包含：

初始培养基、Rho蛋白酶抑制剂、抗生素、胃泌素、A8301、非必需氨基酸、霍乱毒素、胰岛素样生长因子-1、烟酰胺、胰岛素、胎牛血清、以及选自B27添加剂和N2添加剂中的至少一种的添加剂，

所述初始培养基选自DMEM/F12、DMEM、F12或RPMI-1640。

2.如权利要求1所述的肠癌原代细胞培养基，其特征在于：

所述Rho蛋白激酶抑制剂选自Y27632、法舒地尔、和H-1152中的一种或多种，浓度为2.5～40μM，优选为2.5～5μM；

所述抗生素选自链霉素/青霉素、两性霉素B和Primocin中的一种或多种，当选自链霉素/青霉素时，链霉素浓度范围为25～400μg/mL，优选为50～200μg/mL，更优选为200μg/m，青霉素浓度范围为25～400U/mL，优选为50～200U/mL，更优选为200U/mL；当选自两性霉素B时，浓度范围为0.25～4μg/mL，优选为0.5～2μg/mL；当选自Primocin时，浓度范围为25～400μg/mL，优选为50～200μg/mL；

所述胃泌素的浓度为1.25～20nM，优选为2.5～10nM；

所述A8301的浓度为25～200nM；

所述非必需氨基酸为选自甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸中的一种或多种，总浓度为25～400μM；

所述霍乱毒素的浓度为1.25～20ng/mL，优选为2.5～5ng/mL；

所述胰岛素样生长因子-1的浓度为5～405ng/mL；

所述烟酰胺的浓度为2～8mM，优选为4～8mM；

所述胰岛素的浓度为0.5～4μg/mL，优选为1～2μg/mL；

所述胎牛血清相对于培养基的体积浓度为2.5％(v/v)～5％(v/v)；

所述B27或N2添加剂相对于培养基的体积比为1:25～1:200，优选为1:25～1:50。

3.一种肠癌原代细胞的培养方法，其特征在于：

使用如权利要求1或2所述的肠癌原代细胞培养基对肠癌原代细胞进行培养。

4.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于：

将肠癌原代细胞按照细胞密度1～10×10⁴个/cm²种入培养皿中，，并按照细胞密度2～3×10⁴个/cm²加入滋养细胞，然后使用如权利要求1或2所述的肠癌原代细胞培养基进行培养。

5.如权利要求4所述的培养方法，其特征在于：

所述滋养细胞为辐照后的NIH-3T3细胞，辐照源为X射线或者γ射线，辐照剂量为30～50Gy。

6.一种肠癌疾病的药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用如权利要求3～5中任一项所述的肠癌原代细胞的培养方法培养肠癌原代细胞；

(2)选定需要检测的药物并按照所需浓度梯度进行稀释；

(3)对(1)中培养得到的细胞添加各浓度梯度的所述药物；

(4)进行细胞活性测试。