[发明专利]一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及制备方法

权利要求书

1.一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：在培养基中培养人脐带来源的间充质干细胞(MSCs)，将原代培养的MSCs在液氮罐中保存，取液氮罐中保存的MSCs冻存管，复苏，在二氧化碳培养箱中培养，传代培养至第五代后用于后续的步骤；

步骤二：含干细胞微球的制备，采用静电喷雾法，海藻酸钠-MSCs混合液经喷雾、固化后形成内部包埋有MSCs的海藻酸钠微球，将经过静电喷雾形成的微球收集于氯化钙溶液中进行交联，得到包埋有MSCs的海藻酸钠微球；

步骤三：复合胶原蛋白水凝胶的制备，在一定条件下，调节胶原蛋白溶液为中性，加入步骤一的包埋有MSCs的海藻酸钠微球搅拌均匀后得到初级复合胶原蛋白水凝胶，对初级复合胶原蛋白水凝胶进行培养，得到复合胶原蛋白水凝胶。

2.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤一中的培养基为①α-MEM 5％-10％FBS或②人间充质干细胞无血清基础培养基5％-10％人间充质干细胞无血清添加物。

3.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤一的培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。

4.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤一的培养后的干细胞通过微球包埋，检测生长状态，细胞活性，物质分泌，存活时间等。

5.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤二的海藻酸钠溶液的浓度为1-3％(w/v)，粘度为100-300CPS。

6.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤二的氯化钙溶液的浓度为5-15％(w/v)。

7.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤二的所有材料经过高压蒸汽灭菌(121℃，20min)。

8.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤二的含干细胞微球粒径通过粒度仪检测，包埋干细胞生长状态评价通过荧光显微镜观察检测。

9.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤二微球包埋干细胞后，需搭载水凝胶作为载体和物理屏障，制备完成后，检测机械强度、孔隙大小、降解时间等。

10.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤三的一定条件为冰水水浴。

11.根据权利要求1所述的一种基于干细胞微包埋复合水凝胶的创面敷料及其制备方法，其特征在于，所述步骤三的初级复合胶原蛋白水凝胶培养条件为：在二氧化碳培养箱中初次培养成胶后，加培养基，37℃，5％CO₂培养箱中再次培养。