[发明专利]一种基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法

权利要求书

1.一种基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

以柠檬酸和甲酰胺为反应物，采用溶剂热法，溶剂热反应完成后，冷却至室温、加入丙酮、冷冻至产生碳点沉淀，分离，洗涤、过滤、干燥，得到红棕色碳点；

以吖啶橙为供体，所述碳点为受体，待测miRNA的反义DNA链为探针，采用比率荧光法定量测定miRNA的浓度；

将待测miRNA溶液加至含DNA探针的溶液中于37~37.5℃孵育90~100分钟，加入含吖啶橙的溶液并吸附10~15分钟，加入含碳点的溶液并静置10~15分钟；用荧光分光光度计测试上述混合溶液并计算出待测miRNA的浓度。

2.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，所述柠檬酸和甲酰胺的体积比为0.04~0.06：1。

3.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，所述溶剂热法的反应条件为：140~200℃反应4~12小时。

4.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，所有溶液的溶剂均为超纯水。

5.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，所述DNA探针的序列为5’-3’：ACAGGCCGGGACAAGTGCAATA；

或，所述待测miRNAhsa-miR-92a-3p的序列为5’-3’：

UAUUGCACUUGUCCCGGCCUGU。

6.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，在检测待测miRNA浓度之前，绘制miRNA浓度与吖啶橙/碳点荧光强度比值之间的标准曲线，以miRNA浓度为横坐标，以吖啶橙/碳点荧光强度比值为纵坐标，线性拟合各点得到标准曲线。

7.如权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法，其特征在于，所述荧光分光光度计的参数设定：激发波长为492 nm，发射波长范围为512~675nm。

8.一种基于权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法的试剂盒，其特征在于，包括：吖啶橙、碳点、待测miRNA的反义DNA链为探针。

9.基于权利要求1所述的基于吖啶橙和碳点的比率荧光用于miRNA体外检测的方法在体外检测miRNA中的应用。