[发明专利]小鼠上胚层干细胞向新型多能干细胞转化的培养方法

权利要求书

1.一种用于提高分离的多潜能细胞发育潜能的无血清培养液，其特征在于，所述培养液包含基础培养液和用于提高细胞潜能的促进剂；

其中所述的促进剂包括：

(a)GSK抑制剂；较佳地CHIR99021；

(b)Wnt抑制剂；较佳地XAV939；

(c)MAPK抑制剂；较佳地SB203580；

(d)GPCR抑制剂；较佳地(S)-(+)-马来酸二甲茚定；

(e)白血病抑制因子LIF；和

(f)骨形态发生蛋白4。

2.如权利要求1所述的无血清培养液，其特征在于，所述促进剂包括分化抑制剂(组分a、b、c和d)和生物因子(组分e和f)。

3.如权利要求1所述的无血清培养液，其特征在于，所述促进剂具有选自下组的一个或多个特征：

(a)所述GSK抑制剂的浓度为0.5～20μmol/L；

(b)所述Wnt抑制剂的浓度为0.2～10μmol/L；

(c)所述MAPK抑制剂的浓度为0.2～20μmol/L；

(d)所述GPCR抑制剂的浓度为0.1～10μmol/L；

(e)所述白血病抑制因子LIF的浓度为500～2000U/mL；

(f)所述骨形态发生蛋白4的浓度为10～100ng/mL；

其中，各浓度按培养液的总体积计。

4.一种制备权利要求1所述提高分离的多潜能细胞发育潜能的无血清培养液的方法，其特征在于，包括步骤：

将基础培养液和用于提高细胞潜能的促进剂进行混合，从而形成权利要求1所述的培养液；

其中，所述的促进剂包括：

(a)GSK抑制剂；较佳地CHIR99021；

(b)Wnt抑制剂；较佳地XAV939；

(c)MAPK抑制剂；较佳地SB203580；

(d)GPCR抑制剂；较佳地(S)-(+)-马来酸二甲茚定；

(e)白血病抑制因子LIF；和

(f)骨形态发生蛋白4。

5.一种制备多潜能干细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

(S1)提供分离的上胚层干细胞(EpiSC)；

(S2)在权利要求1所述的培养液中，诱导培养所述的上胚层干细胞(EpiSC)，从而获得所述的多潜能干细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的上胚层干细胞来源于胚胎E6天-7天(较佳地约E6.5天)的胚胎细胞。

7.在如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(S2)中，诱导培养的时间为4-10天；较佳地，5-7天。

8.一种多潜能干细胞，其特征在于，所述的干细胞是采用权利要求5所述的方法制备的。

9.如权利要求8所述的多潜能干细胞，其特征在于，在X-L培养条件下，培养A0数量的小鼠多潜能干细胞(X-LSCs细胞)和在AF培养条件下，培养A0数量的EpiSCs细胞，在第N天时，获得X-LSCs细胞数量A1和EpiSCs细胞数量A2，其中，A1/A2≥1.2，更佳地，A1/A2≥1.5；其中N≥5(N为正整数)。

10.一种促进剂组合，其特征在于，所述的组合包括：

(a)GSK抑制剂；较佳地CHIR99021；

(b)Wnt抑制剂；较佳地XAV939；

(c)MAPK抑制剂；较佳地SB203580；

(d)GPCR抑制剂；较佳地(S)-(+)-马来酸二甲茚定；

(e)白血病抑制因子LIF；和

(f)骨形态发生蛋白4。