[发明专利]一种基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法及其应用

权利要求书

1.一种基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法，其特征在于，包括如下步骤：

分解步骤：分子探针DCFH-DA进入细胞后在细胞的活性酯酶作用下分解为DCFH；

转化步骤：DCFH被活细胞内的ROS转化为DCF；

定量步骤：通过质谱实现对DCF的绝对定量，继而定量活细胞中的ROS。

2.根据权利要求1所述的基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法，其特征在于，所述分子探针DCFH-DA具有ROS响应特征。

3.根据权利要求1所述的基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法，其特征在于，所述质谱包括超高效液相色谱-三重四级杆质谱。

4.根据权利要求1所述的基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法，其特征在于，细胞内ROS的定量值和细胞计数在细胞数大于等于100个时存在线性关系。

5.根据权利要求3所述的基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法，其特征在于，所述质谱包括超高效液相色谱-三重四级杆质谱的条件为ESI负离子模式；气帘气：35psi；离子化电压：-4500V；去溶剂温度：500℃；雾化气：55psi；辅助加热气：55psi；采用多重反应监测对样品进行分析。

6.一种基于权利要求1-5任一项所述的基于质谱的活细胞内ROS绝对定量方法的应用，其特征在于，应用于恶性实体瘤外周的血循环肿瘤细胞。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述恶性实体瘤包括胰腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌或者前列腺癌。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，DCF对循环肿瘤细胞活性进行区分。