[发明专利]一种重组人白介素-6的制备方法

说明书

本发明公开了一种重组人白介素‑6的制备方法，属于生物工程领域。包括如下步骤：(1)原核表达方式制备重组人白介素‑6包涵体；(2)采用含尿素的洗涤缓冲液A中清洗重组人白介素‑6包涵体，再用洗涤缓冲液B洗涤重组人白介素‑6包涵体，离心收集固体；(3)初步纯化后的重组人白介素‑6包涵体经含有β‑巯基乙醇的变性液中至完全溶解，缓慢加入复性液使重组人白介素‑6包涵体复性，再进行透析和超滤浓缩；(4)使用填充Anti‑IL‑6高亲和吸附剂的亲和吸附柱对复性的重组人白介素‑6包涵体进行亲和纯化，即得。本发明操作简单，处理样本大，步骤少，复性率高。本发明所涉及的重组人白介素‑6的回收率为21％，具有较高的回收率。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种重组人白介素-6的制备方法。

背景技术

在1985年，人白介素-6基因首次克隆为B细胞刺激因子2(BSF-2)，B细胞刺激因子2可诱导B细胞产生免疫球蛋白(Ig)，白介素-6被证明是一种典型的细胞因子。

白介素-6(Tsagarakis S,Kontogeorgos G,Glannou P,et al.Interleukin-6,agrowth promoting cytokine,is present in human pituitary adenomas:animmunocytochemical study[J].Clinical Endocrinology,1992,37.)是一种单链糖蛋白，用于执行信号诱导B细胞分化和差异刺激或抑制细胞生长，具有不同的细胞来源，通常由激活的巨噬细胞、淋巴细胞以及上皮细胞分泌，含有183个氨基酸残基，由于糖基化和磷酸化的程度不一样，不同细胞来源的白介素-6的分子质量为22-30kDa。

白介素-6具有广泛的生物学功能，白介素-6在炎症、免疫反应、造血等方面具有多效性，它可以诱导肝内c反应蛋白(CRP)、补体C3、纤维蛋白原、血小板生成素、血清淀粉样蛋白A和铁调素等急性期蛋白的合成，而抑制白蛋白的生成。高浓度的淀粉样蛋白长时间存在会形成并发症淀粉样变。白介素-6在肝细胞再生中具有浓度依赖性，高水平白介素-6可能抑制肝细胞再生，甚至加重肝损伤，铁调素的产生也会造成与炎症相关的低铁血症和贫血。在造血过程中，白介素-6促进造血干细胞的分化和巨核细胞的成熟，从而导致血小板的释放。白介素-6不仅能促进纤维蛋白原的产生和血小板的释放，而且能激活凝血系统。白介素-6在单核细胞表面诱导组织因子(TF)，通过启动外源性凝血途径促进凝血，进而导致凝血酶的产生。白介素-6也被证明可以激活血管内皮(VE)细胞。VE-钙粘蛋白是一种重要的分子，通过同类分子间结合促进相邻细胞的内皮粘附，而白介素-6可使其分解导致血管渗漏。此外，白介素-6增加了血管内皮生长因子(VEGF)的生成，从而诱导了VE-钙粘蛋白的磷酸化和内化，从而对内皮细胞具有强大的血管通透性作用。通过白介素-6自身或通过VEGF的导入，血管通透性导致间质性水肿，升高组织压力，导致炎症性损伤。

白介素-6在获得性免疫反应中也扮演着重要角色，白介素-6可以刺激抗体产生，促使CD4+细胞诱导分化为效应T细胞。白介素-6的持续或过度分泌失调导致各种疾病的发生或发展。过量表达的白介素-6参与Castleman病的淋巴结肿大,也会增强血管的再生和类风湿性关节炎患者的骨质疏松症。同时白介素-6也作为重要的促炎症细胞因子，在细胞因子风暴的扩大级联反应中起重要作用。

白介素-6具有众多的生物学功能，在一些疾病中被发现是一种可靠治疗靶点，其中包括脓毒血症，类风湿性关节炎等，有研究表明针对白介素-6的靶向治疗在一些癌症治疗中也是有效的。