[发明专利]基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统、方法及应用在审
| 申请号： | 202110142160.X | 申请日： | 2021-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN113186258A | 公开（公告）日： | 2021-07-30 |
| 发明（设计）人： | 宋凤阁;崔倩;杨治庆 | 申请（专利权）人： | 海南微氪生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/70 |
| 代理公司： | 海口翔翔专利事务有限公司 46001 | 代理人： | 莫臻 |
| 地址： | 570000 海南省海口市南海大道266*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas14a 通用 细菌 病毒 检测 系统 方法 应用 | ||
1.基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统，其特征在于，包括CRISPR-Cas14a系统、TSPE和磁性纳米粒子；
所述CRISPR-Cas14a系统包括通用sgRNA和Cas14a；
所述TSPE为标签特异性引物扩增体系，包括含有Tag序列的标签正向引物和含有生物素标记序列的反向引物；
所述磁性纳米粒子可与TSPE的反向引物连接。
2.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统，其特征在于，所述通用sgRNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas14a系统还包括探针DNA，
所述探针DNA修饰有荧光基团和猝灭基团。
4.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统，其特征在于，所述TSPE还包括目标DNA模板。
5.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测系统，其特征在于，所述磁性纳米粒子为链霉亲和素磁珠。
6.基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)将待测样的DNA作为模板，利用DreamTaqTM热启动DNA聚合酶以及目标DNA的标签正向引物、反向引物进行PCR扩增，制备得到TSPE产品；
(2)将TSPE产品与磁性纳米粒子混合，富集，得到磁珠复合物；
(3)利用权利要求1-5所述的通用细菌和病毒检测系统检测磁珠复合物。
7.根据权利要求6所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测方法，其特征在于，所述富集操作包括以下操作：
将TSPE与磁性纳米粒子的混合液室温下搅拌，并用PBS洗涤，通过磁分离获得磁珠复合物。
8.根据权利要求6所述的基于CRISPR-Cas14a的通用细菌和病毒检测方法，其特征在于，还包括：sgRNA的预制备和Cas14a的纯化。
9.一种根据权利要求1-5任一项所述的检测系统在检测无PAM序列DNA中的应用。
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