[发明专利]一株PAS_chr1-3_0141基因敲除的毕赤酵母基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202110143053.9 | 申请日： | 2021-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN112852654B | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 陈勇;侯安奇;应汉杰;余斌;丁赛;蒋颖 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/90;C12N9/16;C12R1/84 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pas_chr1 _0141 基因 酵母 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一株PAS_chr1-3_0141基因敲除的毕赤酵母基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌由原始毕赤酵母的PAS_chr1-3_0141基因失活后改造得到；
其中，所述原始毕赤酵母为ACCC 21040；
其中，所述PAS_chr1-3_0141基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.权利要求1所述毕赤酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）以原始毕赤酵母的基因组DNA为模板，扩增得到PAS_chr1-3_0141基因的上游同源臂和下游同源臂；以质粒pPIC3.5K为模板，扩增得到遗传霉素抗性标记G418基因；
（2）以步骤（1）所得PAS_chr1-3_0141基因的上游同源臂、下游同源臂和遗传霉素抗性标记G418基因为模板，扩增得到基因敲除片段；
（3）将步骤（2）得到的基因敲除片段转化至原始毕赤酵母感受态中，即得PAS_chr1-3_0141基因失活的酿酒酵母基因工程菌。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，所述基因敲除片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.权利要求1所述毕赤酵母基因工程菌在提升成膜量中的应用。
5.权利要求1所述毕赤酵母基因工程菌在产植酸酶中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，以所述毕赤酵母基因工程菌为发酵菌株，通过固定化发酵产植酸酶。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述固定化发酵以天然有机载体、人工合成高分子载体作为固定化介质。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述发酵的温度为28-30℃。
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