[发明专利]一种以腺病毒为载体的冠状病毒疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 202110144105.4 | 申请日： | 2021-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN113248577B | 公开（公告）日： | 2022-10-21 |
| 发明（设计）人： | 高强;郑泽宇;吴慕胜;王治伟;吕哲 | 申请（专利权）人： | 北京科兴中维生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/165 | 分类号： | C07K14/165;C12N15/50;C12N15/861;C12N5/10;A61K39/215;A61K39/39;A61P31/14;A61P11/00;A61P13/12;A61P1/00;A61P9/04 |
| 代理公司： | 北京睿阳联合知识产权代理有限公司 11758 | 代理人： | 郭奥博;张颖 |
| 地址： | 100085 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 载体 冠状病毒 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.以腺病毒为载体的冠状病毒疫苗的目的氨基酸序列，其特征在于，如SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5所示的氨基酸序列中的任意一种。
2.以腺病毒为载体的冠状病毒疫苗的目的基因序列，其特征在于，编码SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5的氨基酸序列的DNA序列中的任意一种。
3.根据权利要求2所述的目的基因序列，其特征在于，所述目的基因序列是经过密码子优化后的DNA序列。
4.包含权利要求2或3所述目的基因序列的腺病毒载体。
5.根据权利要求4所述的腺病毒载体，其特征在于，所述腺病毒载体包括：包含所述目的基因序列的腺病毒穿梭质粒以及腺病毒骨架质粒。
6.根据权利要求4所述的腺病毒载体，其特征在于，所述腺病毒载体包括：包含所述目的基因序列的AdMax腺病毒系统穿梭质粒以及AdMax腺病毒系统骨架质粒。
7.表达权利要求1所述氨基酸序列的细胞，所述细胞中外源转入了权利要求4～6任意一项所述腺病毒载体。
8.根据权利要求7所述的细胞，其特征在于，所述细胞为整合腺病毒E1基因的细胞。
9.根据权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述细胞为HEK-293细胞或HEK-293A细胞。
10.以腺病毒为载体的冠状病毒疫苗，其包含SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4、SEQ5的氨基酸序列中的任意一种。
11.根据权利要求10所述的冠状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗中还含有免疫佐剂。
12.根据权利要求11所述的冠状病毒疫苗，其特征在于，所述免疫佐剂为氢氧化铝佐剂。
13.根据权利要求10～12任意一项所述的冠状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗为液体疫苗。
14.根据权利要求13所述的冠状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗为肌肉内液体注射剂、静脉内液体注射剂、鼻腔内液体注射剂、皮内液体注射剂或皮下液体注射剂。
15.以腺病毒为载体的冠状病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求4～6任意一项所述腺病毒载体转染入细胞，进行细胞培养，收获含有病毒的培养液。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，将转染后的细胞培养至出毒，将病毒从细胞中充分释放后，收集上清液，得第一代毒种；用所述第一代毒种感染细胞，收获含有病毒的培养液。
17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述细胞为整合腺病毒E1基因的细胞。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述细胞为HEK-293细胞或HEK-293A细胞。
19.根据权利要求15～18任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：对所述含有病毒的培养液进行纯化。
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括如下步骤：(1)加入核酸内切酶消化核酸物质；(2)密度梯度离心；(3)凝胶排阻层析。
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