[发明专利]一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法

权利要求书

1.一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法，其特征是：以感染Wolbachia的产雌孤雌松毛虫赤眼蜂品系Tdw雌蜂为母本；以未感染Wolbachia的两性松毛虫赤眼蜂品系Td雄蜂为父本；将雌雄蜂配对杂交，杂交后的子代雌蜂再与两性生殖品系雄蜂父本逐代回交，重复渐渗杂交多代后，对F1代和渐渗杂交n代后的子代蜂进行检测，用于确认核基因遗传信息的替换情况，获得孤雌产雌松毛虫赤眼蜂的渐渗杂交系种群；

孤雌产雌松毛虫赤眼蜂的渐渗杂交系种群的父本基因渗入情况鉴别方法为：采用SSR荧光引物鉴定SSR位点替换情况；

所述SSR荧光引物包括SSR-1，SSR-2，SSR-3，SSR-4：

所述SSR-1上游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：1；

所述SSR-1下游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：2；

所述SSR-2上游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：3；

所述SSR-2下游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：4；

所述SSR-3上游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：5；

所述SSR-3下游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：6；

所述SSR-4上游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：7；

所述SSR-4下游引物核苷酸序列见SEQ ID NO：8。

2.根据权利要求1所述的一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法，其特征是：采用四对SSR荧光引物，对孤雌产雌松毛虫赤眼蜂品系和两性松毛虫赤眼蜂品系的DNA模板进行常规降落PCR，扩增产物经毛细管电泳，实现对SSR位点的快速分型。

3. 根据权利要求1所述的一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法，其特征是：所述SSR位点的扩增产物序列包括SSR1，SSR2 ，SSR3，SSR4，上述SSR位点的扩增产物在孤雌产雌品系和两性品系松毛虫赤眼蜂中的扩增长度和序列均不同，可作为分型依据如下：

所述SSR1在孤雌产雌松毛虫赤眼蜂品系中扩增核苷酸序列见SEQ ID NO：9；

所述SSR1在两性松毛虫赤眼蜂品系核苷酸序列见SEQ ID NO：10；

所述SSR2在孤雌产雌松毛虫赤眼蜂品系中扩增核苷酸序列见SEQ ID NO：11；

所述SSR2在两性松毛虫赤眼蜂品系核苷酸序列见SEQ ID NO：12；

所述SSR3在孤雌产雌松毛虫赤眼蜂品系中扩增核苷酸序列见SEQ ID NO：13；

所述SSR3在两性松毛虫赤眼蜂品系核苷酸序列见SEQ ID NO：14；

所述SSR4在孤雌产雌松毛虫赤眼蜂品系中扩增核苷酸序列见SEQ ID NO：15；

所述SSR4在两性松毛虫赤眼蜂品系核苷酸序列见SEQ ID NO：16。

4.根据权利要求1所述的一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法，其特征是：以Td品系雄蜂为父本，TdW品系雌蜂为母本，配对杂交后产出的子代进行SSR分型，用于去除F1代中未受精的纯合体子代蜂。

5.根据权利要求1所述的一种孤雌产雌松毛虫赤眼蜂种群的渐渗杂交方法，其特征是：F1代雌蜂与父本Td品系雄蜂配对杂交后，产出F2代雌蜂，如此反复渐渗杂交10代，获得孤雌产雌松毛虫赤眼蜂的渐渗杂交系种群。