[发明专利]检测铅离子的拉曼免疫层析试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种检测铅离子的拉曼免疫层析试纸条及其制备方法与应用，属于分析检测技术领域。该试纸条包括底板和依次搭接在底板上的样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫；所述结合垫上吸附有金核银壳纳米拉曼标记探针，所述金核银壳纳米拉曼标记探针是金核银壳纳米粒子、拉曼标签尼尔蓝与铅单克隆抗体的偶联物；所述NC膜由样品垫方向向吸水垫方向依次设有检测线和质控线。本发明提供的检测铅离子的拉曼免疫层析试纸条，采用表面增强拉曼探针为信号标签，具有独特的光学性质，良好的生物兼容性，表面增强拉曼效应可以起到信号放大作用，大大提高了检测灵敏度，可实现对低浓度目标物的定量检测。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种检测铅离子的拉曼免疫层析试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

近年来，随着城市化和工业化的快速发展，重金属在环境中的暴露程度日益增加。重金属因难以降解的特性，使其可以残留于水、土壤和空气环境中，最终成为人们食物链的一部分，进而引发诸多食品安全问题。铅元素被认为是典型的重金属危害物之一，当人体中铅含量升高时，会破坏血红蛋白的合成，造成贫血、血压增高、肾损伤等严重后果。因此对痕量铅的有效监测成为一个至关重要的问题。目前，已经开发出许多用于测定痕量铅离子的方法，例如电感耦合等离子体质谱法（ICP-AES）、原子吸收光谱法（AAS）、荧光法、阳极溶出伏安法（ASV）以及共振光散射光谱法等。但这些方法都存在着成本高、仪器体积大、对操作人员的专业性要求高、测试周期长和无法进行现场测量的缺陷。

免疫层析技术是20世纪80～90年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法，是最常用的即时检测技术(Point of care test ,POCT)，该方法因具有通量高、检测快速、成本低且不需要复杂的仪器设备等优势，近年来已被广泛应用于生物医药、农药残留、食品安全检测等领域。胶体金是免疫层析技术最常用的标记物，胶体金免疫层析试纸条是现场快速筛查的首选方法，但该方法存在以下缺陷：1、检测灵敏度低、人为因素干扰大；2、只能进行定性或半定量结果分析，无法实现精准定量检测；3、样品基质干扰较大，容易产生假阳性。

近年来，基于拉曼标记的免疫层析技术得到了广泛应用，具有激发光谱宽、发射光谱窄且对称、强度高等优点。通过在粗糙金属表面修饰拉曼标签实现表面增强拉曼效应，可有效提高检测方法的灵敏度并实现定量检测，在快速检测领域具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种基于金核银壳纳米探针的拉曼免疫层析试纸条及其制备方法和应用，使用该拉曼免疫层析试纸条检测铅离子，具有操作简单、灵敏度高，稳定性好，能够实现定量检测。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测铅离子的拉曼免疫层析试纸条，包括底板和依次搭接在底板上的样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫；

所述结合垫上吸附有金核银壳纳米拉曼标记探针，所述金核银壳纳米拉曼标记探针是金纳米粒子、拉曼标签尼尔蓝与铅单克隆抗体的偶联物；

所述NC膜由样品垫方向向吸水垫方向依次设有检测线和质控线；

所述金核银壳纳米拉曼标记探针采用以下方法制备得到：

步骤1，取200 mL纯水加入1 mL 2%氯金酸溶液，混合均匀后油浴至沸腾，搅拌条件下，加入3 mL 1wt.% 柠檬酸三钠溶液，搅拌反应15 min，反应结束后，静置冷却至室温，用纯水将溶液总体积补至200 mL，得到金纳米粒子溶液；

步骤2，取20 mL步骤1的金纳米粒子溶液，搅拌条件下，加入2 mL 1 μM的尼尔蓝溶液，避光搅拌30 min后，加入400 μL 10 mM的抗坏血酸溶液和400μL 10 mM的硝酸银溶液，避光搅拌2 h，将得到的溶液离心，沉淀用水重悬至2 mL；