[发明专利]一种包膜病毒及病原细菌的灭活试剂及其应用

说明书

本发明涉及一种包膜病毒及病原细菌的灭活试剂及其应用。本发明提供的灭活试剂所述灭活试剂主要由低碳醇、酯类化合物、表面活性剂及缓冲液组成，所述低碳醇的体积百分含量为1％‑10％，所述酯类化合物的摩尔浓度为0.5mol/L‑1.5mol/L，所述表面活性剂的体积百分含量为0.5％‑5％；优选的，所述灭活试剂还包括核酸酶抑制剂。该试剂通过破坏包膜病毒的脂质层等来达到灭活效果，作用时间短，只需要1h就可达到灭活效果，同时本发明的试剂也可用于病原细菌的灭活(白喉棒杆菌、嗜肺军团菌等)，且不会影响病原体的核酸及抗原检测，能够满足临床的多元化检测，具有良好的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种包膜病毒及病原细菌的灭活试剂及其应用。

背景技术

临床常见呼吸道致病菌：革兰阳性菌肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、诺卡菌、白喉棒杆菌、炭疽杆菌等；革兰阴性菌卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎克雷伯菌、假单胞菌属细菌、嗜肺军团菌和百日咳博得特菌等。目前已证明95％急性上呼吸道疾病和大部分下呼吸道疾病是由细菌外的病原引起的，其中以呼吸道病毒最常见。

临床中常见的呼吸道病毒有：流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、2、3、呼吸道合胞病毒A型、B型等，腺病毒、冠状病毒等。其中，多种病原体具有极强的传染性，并且近年来新的致病性病毒还在不断地被发现，如SARA病毒、高致病禽流感病毒以及新型冠状病毒等，给临床检测及诊断造成了极大的困难，如何在临床样本的多元化检测过程中降低传染性病原体在实验室传播的可能性，最大程度保护实验室人员，是当下急需解决的问题。

对样本进行灭活处理，能有效减低实验室传播风险，预防控制医疗机构病原体感染，保护实验室检测人员的安全。病毒灭活是使病毒蛋白的高级结构受到破坏，不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，常规的灭活不影响病毒蛋白的一级结构，所以保持病毒的基本抗原性。免疫系统对抗原的识别分成两种，一种是构像表位，一种是线性表位。构象表位意思就是蛋白的三维结构，而线性表位就是蛋白的序列一级结构。T细胞只需要识别线性表位就能接受免疫呈递细胞给出的信号，引发免疫反应。

目前市面常见的病原体灭活方式主要由以下几种：

是通过作用于病原体脂质层/包膜、蛋白质、核酸使其达到灭活效果，如热灭活法60℃ 30min(蛋白质变性)、甲醛(交联使蛋白质变性，又可与核苷酸的氨基作用)、β-丙内酯(作用于核酸)、胍盐(蛋白质变形)、S/D法(作用于病毒包膜)等。

紫外线照射法(影响核酸检测)：影响核酸检测，UVC在照射病毒后，能与其遗传物质发生光化学反应，引起磷酸二酯键与氢键的断裂，形成嘧啶二聚体(如形成尿嘧啶环丁烷二聚体、尿嘧啶水合物、胞嘧啶水合物等)，从而导致病毒失去复制能力。紫外线需要采用200-280nm范围内的波长，253.7纳米波长的消毒灭菌效果最佳，但紫外线穿透力较差，需要直接辐照于物体表面，距离照射物不超过1米为宜；照射时间不少于半小时，消毒完毕后需要充分通风透气。

热灭活法60℃30min(蛋白质变性)：影响抗原检测。将病毒蛋白质分子内的二硫键和氢键断裂，以破坏其二级结构和三级结构。这样一来，蛋白质就会由有规则的螺旋、球状等空间结构变为无规则的伸展肽链，从而造成不可逆的失活。

甲醛(交联使蛋白质变性，又可与核苷酸的氨基作用)：甲醛作为烷化剂，与微生物的核酸和蛋白相结合，导致其基本结构的改变和破坏，影响抗原检测和核酸检测。用甲醛灭活时间长，一般需要在37-39℃处理24h以上或更长时间。并且灭活的效果易受温度、pH、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响。

胍盐(蛋白质变形)：用于变性裂解细胞，提取DNA和RNA，无DNA酶和RNA酶活性，使蛋白质变性，影响抗原检测。