[发明专利]一种景天外植体灭菌方法及愈伤诱导的培养基和诱导方法

说明书

本发明提供了一种景天属植物外植体灭菌方法，包括：获取景天属植物外植体；用酒精浸泡景天属植物外植体；用0.08‑0.12w/w％的HgCl₂水溶液对景天属植物外植体消毒2.8‑3.2min；用无菌水冲洗景天属植物外植体，得到灭菌的景天属植物外植体。本发明还提供了一种用于景天属植物愈伤组织诱导的诱导培养基，包括：MS培养基，5‑8g/L琼脂、25‑35g/L蔗糖、2.4‑2.6mg/L 6‑BA和0.09‑0.11mg/L NAA。本发明还提供了一种景天属植物愈伤组织诱导方法，使用前述诱导培养基诱导培养经前述方法灭菌的景天属植物的外植体以形成景天属植物愈伤组织。该方法愈伤诱导率高。

技术领域

本发明属于园林生物技术领域，涉及一种景天外植体灭菌方法及愈伤诱导培养基和诱导方法，尤其是涉及一种伴矿景天外植体灭菌方法及愈伤诱导的培养基配方和诱导方法。

背景技术

伴矿景天(Sedum plumbizincicola)属于景天科景天属，发现于浙江省的新种，喜生于富含Pb、Zn矿地区。多年生肉质草本，该植物生物量大，繁殖力强，最高吸收浓度1241mg/kg，是修复镉污染农田土壤中重要的修复材料，具有广阔的前景。

尚缺乏高效的伴矿景天外植体灭菌方法和愈伤组织诱导方法，制约着伴矿景天的品种繁育等工作的展开。

发明内容

本发明目的是提供一种伴矿景天组织培养的外植体灭菌方案及愈伤诱导培养基配方，该伴矿景天组织培养的筛选方法包括HgCl₂灭菌时间及无菌水组合筛选，培养基包括愈伤诱导培养基。

实现发明目的的技术方案是通过外植体灭菌方法筛选，保证外植体的成活率，为愈伤诱导提供生长良好的外植体。愈伤诱导培养基通过筛选不同浓度的6-BA、NAA组合，提高外植体的诱导率，为愈伤增殖提供优良的愈伤组织。

其特点主要在于：本试验方案主要以MS为基本培养基，从生长健康的大田苗中选择完整良好的叶片作为外植体，通过灭菌方法筛选，保证外植体成活率。将灭菌好的外植体接种于添加不同配比浓度的激素6-BA、NAA组合的愈伤诱导培养基中，提高愈伤诱导率，为后期实验提供生长良好的愈伤组织，从而实现培育性状优良的伴矿景天组培苗。试验操作简单、方便，有利于筛选出最适合伴矿景天愈伤诱导的培养基配方。

较为具体地，为了解决现有技术中存在的问题，本发明第一方面提供了一种景天属植物外植体灭菌方法，所述灭菌方法包括如下步骤：

(i)获取景天属植物外植体；

(ii)用酒精浸泡所述景天属植物外植体；

(iii)用0.08-0.12w/w％(比如，0.09w/w％、0.10w/w％、0.11w/w％)的HgCl₂水溶液对所述景天属植物外植体消毒2.8-3.2min(比如，2.9min、3.0min、3.1min)；

(iv)用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，得到灭菌的景天属植物外植体。

在一些实施方式中，在步骤(i)中，将所述景天属植物外植体清洗干净并经流水冲洗后使用。

在一些实施方式中，在步骤(i)中，所述清洗干净为0.4-0.6w/w％NaClO水溶液表面消毒4-6min。

在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述酒精为体积分数70-80％(比如，71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％)酒精水溶液。

在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述浸泡时间为25-35s(比如，26s、27s、28s、29s、30s、31s、32s、33s、34s)。

在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述浸泡是在搅拌条件下进行的。