[发明专利]一种羊肚菌菌种保藏及活化方法

说明书

本发明涉及菌种保藏技术领域，特别是指一种羊肚菌菌种保藏及活化方法。包括以下步骤：(1)制作菌种保藏培养基；(2)接种培养；(3)菌种预处理；(4)冷冻保藏；(5)解冻活化。本发明提出的羊肚菌菌种保藏及活化方法，采用适生土壤作为羊肚菌菌种保藏培养基的主要原料，辅以草木灰、沙粒等进行菌丝的培养，通过冷冻预处理及冷冻的方法进行保藏，在需要时再进行菌种活化后，活化后的羊肚菌菌种可达到菌丝生长正常，出菇正常，产量亩产150kg以上，进而可有效推动羊肚菌产业的稳定、健康发展。

技术领域

本发明涉及菌种保藏技术领域，特别是指一种羊肚菌菌种保藏活化方法。

背景技术

目前羊肚菌的栽培模式主要为土壤直接播种发菌，在适当的时间节点补充外源营养的做法，栽培方法简单易行，有的栽培者戏称“如种大白菜”一样简单。但发菌的关键是菌种，羊肚菌有别于其他食用菌，属于子囊菌门、盘菌纲，其特点是繁殖迅速，在正常温度条件下试管种4-6天即可满管(香菇等需要10—15天才能满管)。但羊肚菌老化退化也快，在0-4℃条件下最多可保存30天，在室温条件下只能保存8-10天；且老化退化的菌种栽培很少出菇或不出菇。

据业内相关人士统计，2015/2016年度，全国栽培总量为25000多亩，只有40％左右盈利或保本，有60％为亏本，其主要原因就是菌种的问题。再者，其他食用菌如香菇等选育一个好品种，可连续使用5-8年，如果保存方法得当，则使用年限更长，而羊肚菌则不然，一般都是当年分离选育，当年使用，如要做出菇试验，又会错过下一年度的播种时间，上一年保存的菌种根本不敢使用，并有很多人得到了深刻的教训。

目前羊肚菌菌种的保藏形式还是沿用其他食用菌菌种的保藏方法，主要有：斜面保藏法、蒸馏水保藏法、矿物油保藏法、滤纸保藏法、冷冻干燥法、液氮超低温保藏法等，但应用效果不是很理想；就现在国内羊肚菌的研究“大家”还一直强调必须当年分离当年应用，但是当年分离的菌种没有经过出菇试验，很难保证栽培的成功率，这就违背了正常食用菌的育种原理；因此羊肚菌菌种保藏是羊肚菌产业发展的瓶颈。

发明内容

本发明提出了一种羊肚菌菌种保藏及活化方法，采用天然土壤添加部分辅助材料作为羊肚菌菌丝载体，利用冷冻模式令羊肚菌菌丝休眠，在解除休眠后保证其正常的活性和生物学特性，达到羊肚菌菌种可连续使用的目的。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种羊肚菌菌种保藏及活化方法，包括以下步骤：

(1)制作菌种保藏培养基；

取适生土壤，伴入草木灰和粒径1mm大沙粒，加水调至含水量28％，灌装入试管中，装入量为试管长度的1/3，表面整平，但禁止压实；硅胶塞风口，打捆后牛皮纸封盖，进行高压灭菌；

(2)接种培养；

在无菌条件下，接入菌种于试管中后封闭试管，放入生化培养箱中进行培养，发菌条件为置于18±1℃进行培养，直至羊肚菌菌丝长满试管；其中，菌种接入时接于土壤培养基的表面；

(3)菌种预处理；

当羊肚菌菌丝基本长满试管时，放入0-4℃的冰箱中进行预冷处理，处理时间为48小时；

(4)冷冻保藏；

预处理时间达到48小时后，将试管移至-18～-20℃的冷冻冰箱中进行冷冻保存；

(5)解冻活化

待需要时，将在冷冻冰箱中保存的试管移入0-4℃的冰箱中进行解冻，解冻时间为48小时；解冻程序完成后，再将试管移入18±1℃的生化培养箱中进行活化处理，活化时间为48小时，然后将保藏种转入活化培养基上培养，长满的菌种即可使用。

优选的，所述步骤1中培养基按质量百分比：土壤80％、草木灰10％、大沙粒10％。