[发明专利]一种抗菌羊毛硫肽AmylocinC及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗菌羊毛硫肽AmylocinC及其制备方法和应用，属于抗菌肽制备领域。本发明通过将抗菌羊毛硫肽AmylocinC前体肽AmyC、合成酶AmyMB和肽酶结构域AmyT150的基因通过热激转化法共转化至大肠杆菌感受态细胞，通过大肠杆菌异源表达获得抗菌羊毛硫肽AmylocinC。本发明公开的抗菌羊毛硫肽AmylocinC具有抗菌活性，能够抑制革兰氏阳性菌生长。

技术领域

本发明属于抗菌肽制备领域，具体涉及一种抗菌羊毛硫肽AmylocinC及其制备方法和应用。

背景技术

抗生素是全球最常见的处方药物，但在临床使用中由于耐受药性细菌的出现，使抗生素的使用面对越来越严重的挑战。目前全球为抵御致病菌而导致的抗生素乱用问题日益严重，为此寻找一些环境友好型兼备的抗菌物质代替抗生素已成为研究热点。抗菌肽可以快速有效地杀死具有抗生素抗性的细菌，被认为是传统抗生素的最佳替代物。

羊毛硫肽是革兰氏阳性菌产生的一种环状小分子多肽，对多种食源性致病菌及多药物抗性细菌都有一定的抑制作用。羊毛硫肽类抗菌肽作用靶点通常位于细胞壁或细胞膜上，造成细胞壁或膜的结构不完整，形成孔洞从而杀死细菌，这一杀菌机制也导致羊毛硫肽类抗菌肽的耐药性极少出现。因其特殊的靶标识别作用，羊毛硫肽类抗菌肽几乎不会产生抗性，可作为传统抗生素代替药物。目前已经发现及报道的羊毛硫肽类抗菌肽在50种左右，其中NVB302、Mutacin1140、Duramycin、Gallidermin、Nisin及Microbisporicin已经进入临床研究。这样高的临床研究转化率使得羊毛硫肽类抗菌肽在药物研发中极具前景。

但是羊毛硫肽类抗菌肽通常存在抗菌谱较窄和抗逆性不足的缺点，因此开发研究高效的抗逆性较强的羊毛硫肽类抗菌肽具有重要的价值。随着高通量测序技术的快速发展，基于大量的微生物基因组数据显示，解淀粉芽孢杆菌在合成多种新颖的羊毛硫肽类抗菌肽方面，其潜力远超以往的认知。解淀粉芽孢杆菌中存在很多编码羊毛硫肽类抗菌肽的生物合成基因簇，这些基因簇在野生型菌株通常是沉默的，通过异源表达的方法实现这些羊毛硫肽类抗菌肽的生产对于研发高效的羊毛硫肽类抗菌肽具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效的羊毛硫肽AmylocinC及其制备方法，以解决上述现有技术存在的问题，进一步扩展抗菌羊毛硫肽的种类，为进一步研发抗菌药物提供新的原料。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

第一方面，提供了一种羊毛硫肽AmylocinC，所述羊毛硫肽AmylocinC的分子结构式为：

所述抗菌羊毛硫肽AmylocinC的骨架氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，第2、7、9和10位的苏氨酸脱水形成脱氢丁氨酸，第16位丝氨酸脱水并与第20位半胱氨酸形成硫醚环，第27丝氨酸脱水并与第32位半胱氨酸形成硫醚环。

第二方面，提供了所述的抗菌羊毛硫肽AmylocinC的制备方法，将抗菌羊毛硫肽AmylocinC前体肽AmyC、合成酶AmyMB和肽酶结构域AmyT150的基因共转化至大肠杆菌感受态细胞，通过大肠杆菌异源表达获得抗菌羊毛硫肽AmylocinC。

优选的，所述羊毛硫肽前体肽AmyC基因序列为如下至少一种：

1)SEQ ID NO.1所示的基因序列；

2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ ID NO.2所示多肽序列的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码SEQ ID NO.2所示多肽序列的DNA分子。

优选的，所述的合成酶AmyMB的基因序列为如下至少一种：

1)SEQ ID NO.3所示的基因序列；