[发明专利]一种用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，包括ELISA包被缓冲液、兔抗牛免疫球蛋白G抗体贮存液、包被有兔抗牛免疫球蛋白G抗体的ELISA微孔板、牛免疫球蛋白G贮存液、兔抗牛免疫球蛋白G显色底物标记的抗体贮存液、ELISA浓缩洗涤液、ELISA专用稀释液、ELISA显色底物A液和B液以及终止液。

2.根据权利要求1所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA包被缓冲液为pH9.6 0.05M磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的具体组分为：取1.59gNa₂CO₃和2.93g的NaHCO₃加双蒸水定容至1L，高压灭菌。

3.根据权利要求1所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA专用稀释液为0.15M PH7.4的PBS混合稀释液总体积比0.1％的吐温20制备而成。

4.根据权利要求1所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，还包括用于4℃下长期保存抗原抗体的稳定剂，所述稳定剂包括体积比0.1％的Triton X100，体积比0.05％的proclin 300，体积比20 0.1％的Tween，50ug/ml庆大，0.01M EDTANa，sigma海藻糖0.18g/ml，体积比2％的蔗糖溶液和体积比0.1％的葡聚糖4万；

称取上述原料中固体粉末置于PBS中溶解后混合上述原料中的液体组分，最后采用0.15M PH 7.4的PBS定容制备。

5.根据权利要求3或者权利要求4中任意一项所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，所述0.15M PH 7.4的PBS为：取02g KH2PO4、0.29gNa2HPO4.12H2O、8.0gNaCl和0.2gKCl，加双蒸水定容至1000ml制备而成。

6.根据权利要求1所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，所述终止液为1-2mol/L的硫酸溶液。

7.根据权利要求1所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，所述显色底物A液为过氧化氢，所述B液为邻苯二胺。

8.一种牛免疫球蛋白G的定量检测方法，使用如权利要求1-6中任意一项所述的用于定量检测牛免疫球蛋白G的ELISA试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：包被，以ELISA包被缓冲液将兔抗牛免疫球蛋白G抗体稀释到工作浓度，加入到酶标板，放入湿盒，4℃孵育过夜，用ELISA浓缩洗涤液洗涤，拍干；

步骤2：抗原配制，向微孔板中加入工作浓度的牛免疫球蛋白G溶液，每孔100ul,37℃，孵育1.5h,用ELISA浓缩洗涤液洗涤，拍干；

步骤3：检抗配制，向所述微孔板中加入工作浓度的兔抗牛免疫球蛋白G酶标抗体，37℃，孵育1h,用ELISA浓缩洗涤液洗涤，拍干；

步骤4：显色，向所述微孔板中先后各加入显色底物A液和显色底物B液，37℃避光显色10-15min；

步骤5：终止，每孔加入1M H₂SO₄作为终止剂，终止反应；

步骤6：读数，450nm下，利用ELX800酶标仪读取吸光度值。

9.根据权利要求8所述的牛免疫球蛋白G的定量检测方法，其特征在于，在步骤1中，所述酶标板中每孔加入100ul的工作浓度兔抗牛免疫球蛋白G抗体；

在步骤2中，所述微孔板中每孔加入100ul的工作浓度的牛免疫球蛋白G溶液；

在步骤5中，每孔加入50ul 1M H₂SO₄作为终止剂。