[发明专利]建库方法及应用

权利要求书

1.一种建库方法，其特征在于，包括：

(1)针对石蜡包埋后的生物样本，进行裂解处理，并利用沉淀法从所述裂解处理得到的裂解液收集核酸样本，以便得到浓缩核酸，其中，所述核酸样本中含有长度不大于200bp的核酸片段；

(2)对所述浓缩核酸进行末端修复及加入接头，以便获得连接有接头的核酸样本；和

(3)对所述连接有接头的核酸样本进行扩增处理，以便获得扩增产物，所述扩增产物构成测序文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本被石蜡包埋不少于1年，并且所述裂解液中核酸的含量不超过100ng。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用沉淀法从所述裂解处理得到的裂解液收集核酸样本进一步包括：

(1-A)将所述裂解液与3M醋酸钠溶液、1微升20μg/μL的糖原和无水乙醇混合，其中，所述3M醋酸钠溶液与所述裂解液的体积比(0.1～0.2):1，所述无水乙醇与所述裂解液的体积比为(2～3):1；

(1-B)将步骤(1-A)中得到的溶液置于-10℃～-30℃不少于30分钟；和

(1-C)将步骤(1-B)中得到的溶液进行离心以便获得所述核酸样本。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸样本为RNA，并且在步骤(2)之前，进一步包括：

(1-1)将所述核酸样本进行反转录处理，以便获得含有DNA的核酸溶液；和

(1-2)将所述含有DNA的核酸溶液与聚乙二醇混合后，将所得到的混合物进行磁珠纯化，其中，所述含有DNA的核酸溶液与聚乙二醇的体积比为1：(0.5～0.7)。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在扩增处理之前和之后的至少之一，将含有核酸的样本与聚乙二醇混合后进行磁珠纯化，所述含有核酸的样本与聚乙二醇的体积比为1：(0.5～0.7)。

6.一种测序文库，其特征在于，是由权利要求1～5任一项所述的方法获得的，其中，所述测序文库中插入片段不大于200bp的核酸片段占样本总核酸的比例不小于70％。

7.一种测序方法，其特征在于，包括：

根据权利要求1～5任一项所述的方法，构建测序文库；

利用高通量测序技术对所述测序文库进行测序。

8.一种测序结果分析方法，其特征在于，包括：

根据权利要求7所述的方法，进行测序，以便获得由测序读段构成的测序结果；

从所述测序结果中，选择插入片段不小于50bp的测序读段，以便获得经过过滤的测序结果；

将所述经过过滤的测序结果与参考序列进行比对，以便获得分析结果。