[发明专利]催化长侧链芳香族胺与2-酮丁酸合成L-2-氨基丁酸的方法有效
| 申请号： | 202110149981.6 | 申请日： | 2021-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN112680487B | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 罗玮;胡佳桂 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 催化 长侧链 芳香族 丁酸 合成 氨基 方法 | ||
1.一种催化芳香族胺与2-酮丁酸合成L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括采用氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ω-转氨酶作为催化剂催化芳香族胺与2-酮丁酸合成L-2-氨基丁酸；所述芳香族胺为苄胺、(S)-苯乙胺、(S)-苯丙胺或(S)-苯基丁胺。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，编码所述的ω-转氨酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，催化反应的体系包括：1~5U/mL的ω-转氨酶、5~15mM芳香族胺与5~15mM 2-酮丁酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，催化反应的条件是在25~40℃、pH 7~8条件下搅拌反应。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，催化反应通过加酸进行终止反应。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的ω-转氨酶通过如下方法进行制备：
（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的ω-转氨酶编码基因与质粒连接后转入宿主菌中，得到表达ω-转氨酶的重组菌；
（2）采用步骤（1）构建的重组菌诱导发酵生产得到含有ω-转氨酶的发酵粗酶液；
（3）将步骤（2）的发酵粗酶液进行纯化得到ω-转氨酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的质粒为pET28a(+)。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的诱导发酵是在发酵至OD为0.5~0.7时，加入IPTG在15~18℃进行低温诱导产酶。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的纯化包括采用镍离子亲和层析柱上样，咪唑作为流动相进行梯度洗脱；洗脱液经G25脱盐柱脱盐后超滤浓缩。
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