[发明专利]一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒，所用磁珠为硅羟基磁珠，由多种不同粒径的磁珠混合组成，粒径大小为10～1000nm。捕获核酸的能力强，更适用于微量病毒核酸提取。该试剂盒原料易得、成本低廉；常温贮存，便于运输及使用；提取步骤简便，裂解结合只需加样本、裂解液、磁珠即可进行，无需加入蛋白酶K、CarrierRNA等进口原材料。病毒DNARNA共提，回收率高；无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂，对操作人员安全无毒副作用；操作简便，无需离心，对仪器设备要求不高；可匹配高通量自动提取仪；适用于从环境样本，如污水、冰柜、海鲜肉类、食品内外包装等微量病毒样本中提取病毒核酸。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，具体地，涉及一种基于磁珠法提取病毒样本的核酸提取试剂盒。

背景技术

核酸是遗传信息的载体，是基因表达的物质基础。核酸包括DNA和RNA两种，广泛存在于所有的动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合的状态存在。核酸分子的结构改变，必将导致生物功能的改变，如病毒的致病作用，通过病毒核酸侵入机体细胞所至，除此之外，恶性肿瘤、遗传病变、代谢病等都与核酸的分子结构和功能的改变密切相关，故无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。

常见的核酸提取纯化方法包括苯酚氯仿抽提法、碱裂解法、煮沸法、离心柱法、磁珠法。苯酚氯仿抽提法因其使用了苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，且对核酸的回收率低，操作复杂等因素，渐渐退出市场，此外因各实验室条件不同及针对的提取纯化样本不同。煮沸法和离心柱法等提取方法在临床上也有一定的应用，但煮沸法，因其需要进行加热，增加了气溶胶污染的风险，离心柱法因其需要配备高速离心机、成本高，难于实现自动化。磁珠法是较为常用的核酸提取方法，且普遍认为其对病原体的核酸提取具有简便、高效、提取浓度、纯度较高等优势。另外，不同的提取方法因其提取产物浓度、纯度的差别以及对DNA/RNA的保护程度不同，将在一定程度上影响核酸尤其是临界阳性样本的核酸检出。

相较于其他方法，磁珠法操作更加简便、高效、高质量。传统的核酸提取纯化试剂盒(磁珠法)主要由裂解液、结合液、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液、纳米磁珠等组成。磁珠法核酸提取纯化技术利用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰制备成超顺磁性纳米磁珠，以纳米磁珠作为固相载体，使得样本释放的核酸能特异的结合在纳米磁珠上，通过外加磁场的作用，实现对核酸的分离和纯化然后用洗涤液对样本溶液中的蛋白质、多糖、盐离子进行洗涤去除，在低盐高PH条件下使核酸与磁珠分离，从而获得高纯度的核酸溶液，因其适用于多种样品类型，且对样品要求较低，可配合自动化核酸提取仪实现提取的自动化、高通量等优势，近年来被广泛应用。

进口海产品、牛羊肉、污水、公共卫生场所的环境等样本由于其病毒载量较低，样本杂质较多、成分复杂等特点，对病毒提取提出了新的挑战和要求。目前市场上多为用于咽拭子、血液、组织等样本的核酸提取试剂盒(磁珠法)，不太适用于此次突发疫情中的环境类样本的病毒检测。

市场上较少针对环境类样本的病毒核酸提取试剂盒，且现有的大多数核酸提取试剂盒提取步骤复杂、无法实现病毒DNA/RNA共提取，对于新发突变的病毒，无法预知是DNA病毒还是RNA病毒，选择不合适的试剂盒进行核酸提取，会增加检测失败的几率和难度，同时增加检测的成本。

试剂盒组分还添加了进口原材料如：蛋白酶K，Carrier RNA等，在面对突发公共卫生事件中，进口原材料不仅购买难度大、周期长，还大大增加了试剂盒的生产成本。在面临突发公共卫生事件爆发时，进口原材料无法保证货源的供应，且成本高，大大增加了试剂盒的生产周期；若采用国产原材料代替，又无法保证试剂盒的性能。

除此之外，蛋白酶K、Carrier RNA的运输和保存条件相对苛刻，需在-20℃条件下保存，故其产品不易于保存和运输。无论是传统的核酸提取纯化试剂盒还是改良优化后的试剂盒，其为了使样本能更充分的裂解，往往会将裂解和结合步骤分开进行，使得提取纯化过程不仅耗时长，操作复杂，还增加了检测成本。