[发明专利]一种重组质粒、美白剂、其制备方法及相关应用

说明书

本说明书一个或多个实施例提供一种重组质粒、美白剂、制备方法及相关应用。所述重组质粒在基础质粒上包括pTyr启动子，egfp基因、T2A基因和TCS基因；pTyr启动子，egfp基因，T2A基因和TCS基因位于pTyr启动子和基础质粒的终止子之间。制备方法包括：酶切基础质粒，PCR扩增并重组得第一重组质粒pcDNA3.1+egfp‑T2A；酶切其并插入TCS序列，得第二重组质粒pcDNA3.1+egfp‑T2A‑TCS；PCR扩增Tyr启动子片段，酶切第二重组质粒中的CMV启动子并重组，得到重组质粒。该重组质粒能够特异性地诱导黑色素细胞“自然”死亡而不损伤正常的细胞，具有优良的靶向性。

技术领域

本说明书一个或多个实施例涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组质粒、美白剂、其制备方法及相关应用。

背景技术

目前市场上的美白剂主要是铜离子络合剂和氧化反应抑制剂。铜离子络合剂多具有细胞毒性，会引起更多的细胞损伤。氧化反应抑制剂存在药效不稳定等问题。

发明内容

有鉴于此，本说明书一个或多个实施例的目的在于提出一种重组质粒、美白剂、制备方法及相关应用，以解决现有技术中存在的问题。

基于上述目的，本说明书一个或多个实施例提供了一种重组质粒，在基础质粒上包括pTyr启动子，egfp基因、T2A基因和TCS基因；所述egfp基因，所述T2A基因和TCS基因位于所述pTyr启动子和基础质粒的终止子之间；所述pTyr启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述egfp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述T2A基因的核苷酸序列如SEQID NO:3所示。

在其中一个实施例中，所述基础质粒为pcDNA3.1+，所述重组质粒的苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本说明书一个或多个实施例还提供一种重组质粒的制备方法，包括：

酶切基础质粒，PCR扩增pcDNA3.1+egfp并重组得到第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A；其中， egfp基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示； T2A基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示；

酶切所述第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A，将TCS序列插入所得酶切位点，得到第二重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A-TCS；

PCR扩增Tyr启动子片段，酶切所述第二重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A-TCS中的CMV启动子并重组，得到重组质粒pTyr+egfp-T2A-TCS；其中，所述pTyr启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本说明书一个或多个实施例中，所述得到第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A的步骤具体包括：

使用EcoRV-HF酶酶切pcDNA3.1+质粒，得到第一酶切片段；

以pcDNA3.1+egfp为模板，采用如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的第一引物，经PCR扩增，得到第一扩增片段；

连接所述第一酶切片段和所述第一扩增片段，并将连接产物转化Trans10感受态，涂布至含有AMP的LB平板，得到所述第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A。

本说明书一个或多个实施例中，所述酶切所述第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A的步骤具体包括：

使用EcoRV-HF酶酶切所述第一重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A。

本说明书一个或多个实施例中，所述得到重组质粒pTyr+egfp-T2A-TCS的步骤具体包括：

使用MluI酶和NheI酶酶切所述第二重组质粒pcDNA3.1+egfp-T2A-TCS，得到第二酶切片段；

以B16细胞DNA为模板，采用如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的第二引物，经PCR扩增，得到第二扩增片段；