[发明专利]一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体

权利要求书

1.一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，按5’-3’方向，所述构建体包括：

(1)5’UTR序列，包含5’帽结构；

(2)编码复制酶的一种或多种核苷酸序列；

(3)指导RNA复制子复制的5’端识别序列和亚基因组启动子SGP；

(4)多克隆位点；

(5)目的基因或异源核苷酸序列：其受所述亚基因组启动子控制；

(6)指导RNA复制子复制的3’端识别序列；

(7)保证RNA的稳定性以及目的基因有效复制的3’UTR和3’polyA。

2.如权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，所述复制酶源自甲病毒。

3.如权利要求2所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，所述甲病毒为塞姆利基森林病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、辛德毕斯病毒或基孔肯雅病毒。

4.如权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，5’端识别序列和3’端识别序列在所述复制酶的存在下指导所述RNA复制子的复制；

所述5’端识别序列和3’端识别序列包含CSE1和CSE2。

5.如权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，5’UTR为病毒、真核生物或原核生物的5’UTR；

5’帽结构为天然5’-帽或5’-帽类似物；

3’UTR为病毒、真核生物或原核生物mRNA的3’UTR。

6.如权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，编码复制酶的核苷酸序列包含开放阅读框；编码复制酶的开放阅读框包含RNA复制所需的非结构蛋白的编码区。

7.如权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体，其特征在于，所述异源核苷酸序列编码目的蛋白，编码所述目的蛋白的开放阅读框的表达受到亚基因组启动子的控制。

8.权利要求1所述的一种高效表达目的蛋白的顺式复制子RNA构建体,其特征在于，其包括以重组病毒载体、质粒DNA、线性DNA、体外转录RNA或提取的细胞内转录RNA形式。

9.包含权利要求1-8任一项所述顺式复制子RNA构建体的重组载体，其特征在于，所述重组载体不驱动复制酶的复制，并且高效驱动目的基因的复制和表达。

10.编码权利要求1-8任一项所述的顺式复制子RNA构建体的核苷酸序列。

11.一种利用生物体生产蛋白质的方法，其特征在于，包括获取权利要求1-8任一项用于表达目的蛋白的所述构建体或权利要求9所述的重组载体，并将所述构建体或所述重组载体转染生物体中的步骤。