[发明专利]一种新冠肺炎核酸检测质控病毒的制备及质控方法

说明书

一种新冠肺炎核酸检测质控病毒的制备及质控方法，根据新冠病毒易在表达ACE2的宿主细胞中繁殖以及SV40LT可使人组织细胞永生化的机制，将ACE2和SV40LT基因转染产前诊断后剩余的羊水干细胞，开发因过表达ACE2和SV40LT而易使新冠病毒进入细胞内繁殖的永生化新冠病毒孵化细胞，使新冠病毒与孵化细胞共同培养时能随孵化细胞的无限扩增而大量繁殖，然后以所繁殖的病毒批量制备核酸检测质控病毒，继之以质控病毒取代核酸检测试剂盒配备的或有关单位使用的与被测样本不一致的假病毒或噬菌体病毒样颗粒等模拟质控物，并使用质控病毒建立基于Levey‑Jennings质控图的核酸检测室内质控方法，以便能使用真实病毒的质控物实时监测室内质控是否失控，判断同批核酸检测结果是否准确可靠。

技术领域

本发明涉及一种新冠肺炎核酸检测质控病毒的制备及质控方法，属于生物医学领域的传染病基因诊断技术。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)由单股正链核酸(ssRNA)、刺突蛋白(S)、膜蛋白(M)、包膜蛋白(E)和核壳蛋白(N)构成。因新冠肺炎患者在下呼吸道具有更高的病毒载量，所以支气管/肺泡灌洗液的检出率相对较高，目前常以鼻咽拭子做新冠病毒的核酸检测。

文献报道，采用实时荧光RT-PCR法检测新冠病毒核酸是目前诊断新冠肺炎的金标准，至今国家药品监督管理局已经批准了20多种实时荧光RT-PCR技术的新冠病毒核酸检测试剂盒，该技术灵敏、简便、低廉，能在疾病早期或潜伏期内识别微量的新冠病毒颗粒，但通常因受疾病发展阶段、样本采集质量、样本运输和保存条件、试剂和耗材质量以及实验操作技术人员水平等影响而使核酸检测结果产生假阴性或假阳性。

因此，各类新冠病毒核酸检测实验室操作规范及专家共识均建议以室内质控监测核酸检测结果的准确性，但规范的室内质控需采用与被测样本相同的质控物并与被测样本在相同的条件下进行检测，即合格的室内质控物应是新冠病毒颗粒，然而这很难实现，所以只能使用被称为模拟质控物或假病毒的噬菌体病毒样颗粒替代新冠病毒颗粒进行室内质控。

文献报道，目前国内外有多家生物公司研发的新冠病毒核酸检测试剂盒的室内质控品均不是以新冠病毒颗粒而是以假病毒为原料制备，而且这些质控品价格昂贵，其室内质控的监测效果还有待于用户反馈。

另外，虽然基因组测序不但可以鉴定新发的未知新冠病毒株，也可用于早期低病毒含量样本的检测或实时荧光RT-PCR检测可疑结果的确认，但因缺乏可用于质量控制的阳性和阴性参考品等原因而目前仍不能适合于临床新冠样本的常规检测。

文献报道，规范的室内质控应在每批检测中均设立1份弱阳性质控和3份阴性质控，室内质控应与待测样本同批次参与全检测过程，只有当3个阴性质控全部为阴性而弱阳性质控为阳性时才能视为在控，可发报告，反之则为失控，不可发出报告，应立即分析误差原因，必要时重新检测。室间质控是由卫生质管部门统一组织，将质控物分装后发放到各参与实验室进行检测，然后分析各实验室的检测结果是否准确。

鉴于新冠病毒核酸检测质控物质贫乏，国内文献报道，建议自制质控品，用以取代试剂盒中配备的弱阳性对照，即以真实的新冠病毒替代假病毒。制备方法是将实验室发现的新冠病毒核酸检测阳性标本置56℃干浴灭活30min，制备2个或2个以上靶点的低值质控品，并建议用生理盐水/DEPC处理水作为阴性质控，使用时至少1份阴性质控用于环境污染的评估，即将开盖的质控品置于PCR检测的提取仪/操作台面上过夜后进行检测。

综上，因目前还没有制备新冠病毒核酸检测质控品的理想方法而致质控物贫乏，无论是试剂盒中配备的阳性质控还是实验中使用的其他质控，通常以模拟质控物、假病毒或噬菌体病毒样颗粒替代新冠病毒颗粒进行质控，这难以起到预期的质量控制作用。