[发明专利]苦番红花素的对照品的制备方法

权利要求书

1.一种苦番红花素的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

正相色谱纯化工序：将含有苦番红花素的原料提取物粗品上样至正相色谱柱，用包含乙酸乙酯、甲醇、水的洗脱液进行洗脱，乙酸乙酯:甲醇:水的比例为15～25: 1～2: 0.05～0.15，根据HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液浓缩得到第一粗品浓缩液；

中压反相色谱纯化工序：将第一粗品浓缩液上样至中压反相色谱，用浓度12～16%的乙腈水溶液以压力为0.05～0.5Mpa进行洗脱，根据HPLC检测收集洗脱液，将洗脱液浓缩得到半成品浓缩液，将浓缩液冷冻干燥得到苦番红花素半成品粉末；

高压反相色谱纯化工序，将苦番红花素半成品粉末用甲醇水溶液溶解上样至高压反相色谱柱，以5～15.0Mpa压力用40～60%甲醇水溶液洗脱，除去色素及少量的前后杂，收集含有目标物的洗脱液；

目标物富集回收工序，将高压反相色谱纯化工序中得到的含有目标物的洗脱液在45℃下避光浓缩至无醇味，将其全部用上样至中压反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa用乙腈或者甲醇洗脱，得到目标流份，在50℃以下的温度下避光浓缩、冷冻干燥，得到苦番红花素对照品，所述含有苦番红花素的原料提取物粗品的制备方法如下，

将原料西红花粉碎，利用醇系的水溶液浸泡，过滤，滤液，在50℃以下的温度下避光浓缩，再进行冷冻干燥, 正相色谱纯化工序中，正相色谱柱的填料为粒径为100～300目的硅胶,中压反相色谱柱的填料为粒径为40-60um的十八烷基硅烷键合硅胶，高压反相色谱柱的填料为粒径为5-10um的十八烷基硅烷键合硅胶,醇系的水溶液为60%～85%的甲醇水溶液或者60%～85%的乙醇水溶液浸泡,目标物富集回收工序：用90～98%的乙腈洗脱，或者用90～98%的甲醇洗脱。

2.根据权利要求1所述的苦番红花素的对照品的制备方法，其特征在于，正相色谱纯化工序中，所述乙酸乙酯:甲醇:水的混合比例为15～22:1～1.5:0.05～0.15。

3.根据权利要求1所述的苦番红花素的对照品的制备方法，其特征在于，中压反相色谱纯化工序中，用浓度13～15%的乙腈水溶液以压力为0.1～0.3Mpa进行洗脱。

4.根据权利要求1所述的苦番红花素的对照品的制备方法，其特征在于，高压反相色谱纯化工序中，以8～10Mpa压力用45～55%甲醇水溶液洗脱。