[发明专利]重组痘苗病毒、痘苗病毒载体疫苗及其应用与制备方法

说明书

本申请公开了重组痘苗病毒、痘苗病毒载体疫苗及其应用与制备方法。所述重组痘苗病毒包括：胸苷激酶(TK)基因和L025基因的联合缺陷；及重组核酸序列，所述重组核酸序列编码新型冠状病毒的S基因中的第一核酸序列，所述第一核酸序列插入所述重组痘苗病毒的基因组中。所述重组痘苗病毒载体疫苗包括所述重组痘苗病毒以及药物学上可接受的载体或佐剂。所述制备重组痘苗病毒的方法包括将所述重组核酸序列引入痘苗病毒的基因组的目标基因的左臂及右臂之间，得到重组穿梭载体并转染入宿主细胞，形成所述重组痘苗病毒。本申请还公开了编码具有新型冠状病毒S蛋白的重组核酸序列及重组病毒载体。

技术领域

本申请涉及生物工程技术领域，尤其涉及多种重组痘苗病毒、痘苗病毒载体疫苗及其制备方法，用于预防新型冠状病毒的感染中的应用。

背景技术

在开发疫苗时需要考虑的因素包括：(1)免疫系统是怎样对病原(病毒或者细菌)产生免疫反应的；(2)哪些人需要疫苗；以及(3)开发疫苗最好的技术或者策略。根据不同病原的特点，科学家们开发不同类型的疫苗。疫苗的类型包括4大类：(1)减毒活疫苗；(2)灭活的疫苗；(3)亚单位多肽疫苗，重组蛋白疫苗，多糖和结合疫苗；以及(4)类毒素疫苗。

近年来科学家们致力于应用新的技术开发疫苗。目的是更快，更有效地开发出相关的疫苗产品。这方面的新技术包括：(1)核酸疫苗，包括DNA疫苗和 mRNA疫苗；以及(2)重组载体疫苗。

核酸疫苗是通过提供编码病原体上相应蛋白质(抗原)的DNA或者mRNA到身体内的细胞，让宿主细胞表达相应的蛋白质，从而激发免疫反应。核酸疫苗的特点是，开发时间短，安全性较好，具有一定的免疫效果。目前有国内和国外的多家研究机构宣称他们已经开发出新型冠状病毒的DNA或者mRNA疫苗，准备进入量产和动物实验阶段。这无疑是令人振奋的好消息。

最近几年，重组载体疫苗越来越受到重视,得益于人们对重组载体疫苗认识的提高以及相关的技术进步。这类疫苗的作用过程像是发生一次感染，因此可以更有效地刺激免疫系统产生免疫反应。默克公司成功地应用水泡性口炎病毒 (VSV,VesicularStomatitis Virus)为载体开发出预防埃博拉病毒的疫苗 rVSV-ZEBOV，展现出很好的安全性，且具有良好的预防效果，并被世界卫生组织认可。

传统用于预防天花病毒的疫苗痘苗病毒(vaccinia virus)具有良好的有效性及安全性，痘苗病毒的基因组比较大(190kb)，可以容纳大片段的外来基因，容量可达20kb，因此在开发大的靶向蛋白疫苗时具有很好的优势。这类载体主要有2类，一是复制缺陷型的MVA(Modified Vaccinia Ankara),二是复制正常的痘苗病毒(vaccinia virus)。MVA是通过在鸡胚上长期传代痘苗病毒后导致多个影响痘苗病毒复制的基因丢失获得的。另一类是用复制能力正常的痘苗病毒为载体开发的疫苗，可以更有效地激活免疫反应，提高预防效果，但缺点是不适合用于存在免疫缺陷的人。

世界卫生组织把新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2，基因组全长为29903bp(ACCESSION MN908947，VERSION MN908947.3)。新型冠状病毒是一个正链RNA 病毒，RNA病毒的一大特点是很容易发生基因突变。如果标靶核酸或蛋白的稳定性很差，突变速度快，那么开发出的疫苗将来很难对携带已发生突变的新型冠状病毒发挥作用。

故，有必要提供一种能够预防或治疗新型冠状肺炎病毒的重组痘苗病毒及痘苗病毒载体疫苗，以解决目前缺乏有效预防或治疗新型冠状肺炎病毒的疫苗和药物的问题，以遏制新型冠状肺炎病毒的蔓延。

发明内容