[发明专利]伪狂犬病毒FB株gE/gI基因缺失株的构建及其作为疫苗的应用

说明书

本发明采用基因同源重组的方法缺失PRV人工致弱株FB的gE/gI基因，具备了可供鉴别诊断野毒感染的基因标记，适合目前通用的gE ELISA鉴别诊断试剂盒，以缺失株作为种毒制备的灭活疫苗可对PRV新发变异超强毒株FJ‑2012的攻毒产生完全的免疫保护作用；FB gE/gI基因缺失株与Bartha‑K61疫苗株相比具有更高的安全性，因此FB gE/gI基因缺失株也适合作为预防新发变异PRV超强毒株感染的弱毒活疫苗候选株。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株伪狂犬病毒FB株gE/gI基因缺失株的构建及其作为疫苗的应用。

背景技术

伪狂犬病（Pseudorabies, PR），又称奥耶斯基氏病（Aujeszky’s Disease, AD），是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）引起的多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。PRV感染许多哺乳动物，包括猪、牛、绵羊、山羊、狗、兔、野猪、貂、熊、猫、狐狸、鼠和野生小鼠，除过猪以外其余引起严重的神经症状和死亡。而猪是PRV感染后唯一可以存活的动物，因此也是该病毒的贮存宿主，并且是PRV唯一的储存库。该病给全世界生猪养殖业带来巨大的经济损失，但部分欧美国家对该病投入巨大的人力、物力及财力，通过gE-ELISA鉴别诊断技术已经在家猪净化和消灭了该病。多年来，我国普遍采用gE缺失的弱毒活苗免疫接种、野毒监测和净化等技术，该病也得到有效控制，其发病和流行情况趋于稳定，但是从2011年10月开始，我国大部分地区先后在Bartha-K61免疫的规模化猪场再次出现伪狂犬病暴发和流行，在2011年以后分离的变异PRV对于85日龄的育肥猪也具有致死性，给我国养猪业造成严重的经济损失，其主要特点为：(i) 免疫过Bartha-K61 疫苗的怀孕母猪发生高流产率；(ii) 生长猪出现中枢神经系统紊乱并且高死亡率；(iii) 血清高gE阳性率。

PRV给世界各国生猪养殖业带来巨大困扰，特别是养猪量较大的国家，包括南美洲、欧洲和亚洲，但是通过大规模的使用gE缺失疫苗和DIVA（differentiating infectedfrom vaccinated animals, DIVA）鉴别诊断技术，美国和部分欧洲国家已经从家猪中根除了猪伪狂犬病，但在美国、德国等国家，PRV依然在野猪群中流行和传播。中国在1950s年代首次报道了伪狂犬病例，在1970s，Bartha-K61疫苗毒株被引进到中国，从1990s 到2011使用Bartha-K61疫苗株或本地gE缺失弱毒苗使PR得到了很好的控制。然而从2011年10月开始，我国免疫了Bartha-K61疫苗的规模化猪场史无前例的大面积的暴发猪伪狂犬病，并且席卷全国，快速的传播到中国其他省市，对中国养猪业造成了毁灭性打击。研究表明，与经典的PRV毒株相比，从不同流行地区规模化猪场分离到的PRV毒株均表现出毒力增加，对育肥猪和仔猪的致病性增加，并且可以引起育肥猪中大猪的死亡，而且现有疫苗对新发变异毒株不能提供很好的保护，为新发变异的PRV超强毒株。2011年以后分离的所有新发变异超强PRV毒株，与欧洲和美洲毒株或2000年以前分离的中国传统株相比，在基因组序列上具有明显的变异。近年来从我国不同地区分离了大量的新发PRV毒株，包括HNX, ZJ01, HeN1,SMX, TJ, JS, HNB、HN1201、FJ-2012等。因此，在我国PRV的变异和毒力增强给我国现阶段的养猪业带来了严重的困扰。

综上，开发可防控经典PRV和新发变异PRV感染的安全、有效，具备鉴别诊断的新疫苗是十分有必要的。本发明采用基因同源重组的方法缺失PRV人工致弱株FB的gE/gI基因，具备了可供鉴别诊断野毒感染的基因标记，适合目前通用的gE ELISA鉴别诊断试剂盒，以缺失株作为种毒制备的灭活疫苗可对PRV新发变异超强毒株FJ-2012的攻毒产生完全的免疫保护作用；FB gE/gI基因缺失株与Bartha-K61疫苗株相比具有更高的安全性，因此FBgE/gI基因缺失株也适合作为预防新发变异PRV超强毒株感染的弱毒活疫苗候选株。

发明内容

本发明的目的在于提供一株伪狂犬病毒FB株gE/gI基因缺失株的构建及其作为疫苗的应用。