[发明专利]一种降低玻璃酸钠及其衍生物中蛋白质含量的纯化方法

说明书

本发明公开了一种降低玻璃酸钠及其衍生物中蛋白质含量的纯化方法，具体制备过程包括以下工艺步骤：向玻璃酸钠及其衍生物粗品溶液中加入特定类别的蛋白质络合剂，过滤除去不溶物，通过醇沉得到玻璃酸钠及其衍生物的纯品。本发明通过蛋白质络合剂的作用，对去除玻璃酸钠及其衍生物产品中的蛋白质具有很好的效果，可使玻璃酸钠及其衍生物中的蛋白质含量降至0.015％以下，从而显著降低异源性蛋白质引起玻璃酸钠及其衍生物制剂过敏反应的风险，具有极高的临床应用价值；本发明方法工艺过程简单，成本低，工艺易于操作，具有良好的经济性，更适合工业化生产；本发明所得的玻璃酸钠及其衍生物纯度高，安全性好,过敏反应少，为患者带来最大益处。

技术领域

本发明涉及医药生产技术领域，具体为一种降低玻璃酸钠及其衍生物中蛋白质含量的纯化方法。

背景技术

玻璃酸钠又称透明质酸钠或玻尿酸，是一种酸性黏多糖。1934年美国Meyer等首次从牛眼玻璃体中分离出该物质，其二糖单元是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-葡萄糖双糖单位反复交替而形成的一种聚合物，重复的二糖单元以β-1,4糖苷键连接成糖链，其重均分子量一般为10万～1000万Da。玻璃酸钠在自然界中多存在于眼球晶状体、关节腔黏液、皮肤、动脉管壁、脐带等结缔组织、鸡冠以及某些细菌的荚膜中。

玻璃酸钠为高分子化合物，其重复单元结构式为：

玻璃酸钠及其衍生物的制备方法分为生物提取法和微生物发酵法。

生物提取法一般从鸡冠中提取，在鸡冠中直接提取玻璃酸钠的步骤一般为：粗洗﹑精洗绞碎﹑酶解﹑季铵盐络合吸附﹑解离﹑季铵盐二次络合吸附﹑解离﹑醇沉﹑干燥，得玻璃酸钠成品；

在鸡冠中提取并制备交联玻璃酸钠的步骤一般为：粗洗﹑精洗切片﹑浸泡交联﹑纯化水循环提取﹑过滤﹑醇沉﹑干燥，得交联玻璃酸钠原料药。

微生物发酵法是利用酶工程和微生物代谢工程等技术生产的方法，发酵过程是一个复杂的生物反应，有复杂的酶系生化反应，存在多通道代谢途径，产物中多存在蛋白质﹑核酸等杂质。

生物提取及微生物发酵法得到的玻璃酸钠中，蛋白质等杂质是导致其致炎性的主要原因，制备低蛋白质含量的玻璃酸钠是非常必要的，开发新技术用来降低致炎性杂质的含量成为业界关注的重点。由鸡冠中进行生物提取及微生物发酵法制备的玻璃酸钠蛋白质含量较高，为了降低蛋白质含量，一般采用季铵盐络合解离或用微孔滤膜过滤的方法进行纯化。

CN 102516408 A公开了一种玻璃酸钠的纯化方法，将鸡冠提取液用活性炭吸附后过滤，滤液与氯化十六烷基吡啶水溶液搅拌得到沉淀，弃去上清液并用解离液将沉淀溶解，解离后的液体通过稀释至其体积的2～8倍,再进行二次络合沉淀，络合沉淀完毕后弃去上清液，将沉淀洗涤后用解离液将络合沉淀解离，用活性炭吸附后过滤，滤液醇沉后脱水，真空干燥。

CN 104610466 A公开了一种生物提取法制备玻璃酸钠中降低蛋白质含量的方法，所述方法是在氯化十六烷基吡啶与玻璃酸钠的络合物沉淀解离后，向解离液中加入纯化水，稀释解离液离子强度，通过季铵盐络合沉淀解离，低盐浓度下可形成络合物，高盐浓度下逐渐解离。通过这种可逆作用，使解离液中的沉淀重新络合，再经漂洗、二次解离、过滤、醇沉、干燥得到成品。

CN 106883319 A公开了一种降低蛋白质含量的玻璃酸钠的制备方法，所述方法向鸡冠提取液中加入十六烷基三甲基氯化铵进行沉淀络合，将沉淀物加入解离液进行解离，加入稀释剂再次得到沉淀，重复上述步骤至少一次(选择合适的次数)，得到的沉淀加入解离液中解离，醇沉后脱水，真空干燥。

CN 106883320公开了一种降低蛋白质含量的玻璃酸钠的二次解离制备方法，所述方法向鸡冠提取液中加入十六烷基三甲基氯化铵进行沉淀络合，将沉淀物洗涤后加入解离液进行解离，加入稀释剂再次得到沉淀，重复上述步骤一次，得到的沉淀加入解离液中解离，醇沉后脱水，真空干燥。