[发明专利]一种用于检测9种儿童消化道病原体的引物探针组合及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测9种儿童消化道病原体的引物探针组合，其特征在于：包括腺病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ IDNO.3所示；星状病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物序列如SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示；诺如病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ ID NO.8所示，探针序列如SEQ ID NO.9所示；轮状病毒的上游引物序列如SEQID NO.10所示，下游引物序列如SEQ ID NO.11所示，探针序列如SEQ ID NO.12所示；札如病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物序列如SEQ ID NO.14所示，探针序列如SEQ ID NO.15所示；巨细胞病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.16所示，下游引物序列如SEQID NO.17所示，探针序列如SEQ ID NO.18所示；柯萨奇病毒A的上游引物序列如SEQ IDNO.19所示，下游引物序列如SEQ ID NO.20所示，探针序列如SEQ ID NO.21所示；肠道病毒71型的上游引物序列如SEQ ID NO.22所示，下游引物序列如SEQ ID NO.23，探针序列如SEQID NO.24所示；人冠状病毒的上游引物序列如SEQ ID NO.25所示，下游引物序列如SEQ IDNO.26，探针序列如SEQ ID NO.27所示；管家基因的上游引物序列如SEQ ID NO.28所示，下游引物序列如SEQ ID NO.29所示，探针序列如SEQ ID NO.30所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测9种儿童消化道病原体的引物探针组合，其特征在于：所述腺病毒探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1 ；所述星状病毒探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；所述诺如病毒探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述轮状病毒探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQA；所述札如病毒探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述巨细胞病毒探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述柯萨奇病毒A探针的5’端标记有HEX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；所述肠道病毒71型探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；人冠状病毒探针的5’端标记有ROX发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2；管家基因探针的5’端标记有CY5发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2。

3.一种用于检测9种儿童消化道病原体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合、病原体标志物的标准品、逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl₂、DEPC水和Taq酶；所述试剂盒的PCR扩增条件为：55℃逆转录15min；95℃预变性30s；95℃变性10s；60℃退火30s；40个循环。

4.根据权利要求3所述的用于检测9种儿童消化道病原体的试剂盒，其特征在于：所述引物探针组合物中引物在扩增体系中的终浓度为100-1000nM；TaqMan探针在扩增体系中的终浓度为50-500nM。

5.根据权利要求3所述的用于检测9种儿童消化道病原体的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的检测样本为粪便。

6.根据权利要求3所述的用于检测9种儿童消化道病原体的试剂盒，其特征在于，所述病原体标志物的标准品的浓度为10¹³copies/μL。