[发明专利]埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物及试剂盒，埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物中包括有用于检测埃里希氏体的引物和用于检测伯氏疏螺旋体的引物，试剂盒中含有该埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物。利用本发明可同时检测埃里希氏体和伯氏疏螺旋体，并且具有检测快速、高效，定量准确，灵敏度高，特异性强的优点。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物及试剂盒。

背景技术

多重荧光PCR方法具有检测效率高，即多重荧光PCR可以实现一管多检,简化操作流程；节省试剂成本和人员操作时间，尤其在开展大量样品检测时，显著地降低检测成本和操作时间等优势。SYBR Green I染料法荧光定量PCR的性价比较高，可利用SYBR Green染料的荧光信号强度与双链DNA的数量之间的线性关系对PCR体系存在的双链DNA数量进行监测并利用熔解曲线进行鉴别诊断。熔解曲线是反应DNA的双螺旋结构随温度升高产生降解程度的曲线，其总的 DNA双螺旋结构降解一半时的熔解温度称为Tm值，Tm值与基因序列中的G-C值相关，所以，当扩增产物由于G-C值的不同而出现相对应的不同Tm峰值时，可以通过这个特征峰将特异产物与其它产物区分开，达到鉴别诊断的目的。

蜱虫是专性吸血的体外寄生虫，是仅次于蚊子的第二大媒介，可传播细菌、病毒和原生动物等，对公共卫生和畜牧业发展造成严重危害。新兴细菌感染性疾病中的很大一部分是由蜱虫等人畜共患病媒介传播的。这些疾病中最突出的是莱姆病、埃里希体病和巴尔通体病。

伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi,B.g)是引起莱姆病的病原体。莱姆病(Lymedisease,LD)是一种机体多系统多器官炎症性反应的人兽共患病，现已广泛分布于欧洲、亚洲，是美国最常见的蜱虫传播疾病，具有分布广、传播快、致残率高的特点。1986年在黑龙江省林海县首次分离到伯氏疏螺旋体，证明了我国存在伯氏疏螺旋体。目前已证实我国30多个省(自治区、直辖市)存在伯氏疏螺旋体感染， 20个省、市、自治区存在自然疫源地。

无形体科埃里希氏体属的成员在人类和动物中引发埃里希氏体病。埃里希氏体是一种专性的胞内寄生菌，除野生动物宿主外，家畜、伴侣动物和人类也均为其易感宿主。自1935年在阿尔及利亚发现第一株埃里希氏体后各地不断出现埃里希氏体病例，目前已有研究人员从我国犬、鼠、羊、蜱及人体内检测到埃里希氏体核酸及抗体，显示我国可能存在该病的自然疫源地。

随着经济水平的提高，人与自然接触逐渐增多，以蜱虫为媒介的传染病如莱姆病和埃里希氏体病的诊断与防控引起人们的关注。目前主要通过将血细胞进行吉姆萨染色，镜下观察是否存在桑葚体来确诊埃里希氏体病，而莱姆病的诊断虽有现行有效的国家标准，但其推荐的病原分离及血清学检测操作难度大、周期长、对操作人员要求较高，且目前缺少同时诊断这两种疾病的方法及标准。聚合酶链式反应(PCR) 由于特异性好，操作简单成为一种广泛应用的实验室检测，因此建立一种同时诊断莱姆病及埃里希体病的分子生物学诊断方法成为亟待解决的科学问题，也为国家标准的制定提供理论基础和技术支持。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种埃利希氏体病和莱姆病双重荧光定量PCR引物，包括有用于检测埃里希氏体的引物和用于检测伯氏疏螺旋体的引物；

所述用于检测埃里希氏体的引物序列如下：

groel-YG F：5’-AGCTGAATTGGGTACTGCTAAGAA-3’；

groel-YG R：5’-TACAGCAACACCACCAGAAAGT-3’；

所述用于检测伯氏疏螺旋体的引物序列如下：