[发明专利]检测探针、试剂盒及端粒酶活性的直接检测方法

权利要求书

1.一种检测探针，其特征在于，包括金纳米颗粒以及与金纳米颗粒连接的探针序列，所述探针序列包括连接段以及用于端粒酶识别的引物段；所述连接段的序列长度为5-8nt；所述引物段的长度为15-20nt。

2.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述连接段通过Au-S键连接在金纳米颗粒表面。

3.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述引物段序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述金纳米颗粒的直径为5-10nm。

5.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述连接段为polyT序列。

6.一种如权利要求1-5任一所述的检测探针在制备用于检测端粒酶活性的试剂盒中的应用。

7.根据权利要求1-5任一所述的检测探针在纳米孔传感器检测中的应用。

8.一种如权利要求1-5任一所述的检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(S1)取金纳米颗粒溶液，加入TBE溶液与巯基修饰的端粒酶引物序列；

(S2)将步骤(S1)得到的产物加盐老化；

(S3)将步骤(S2)老化后的DNA修饰金纳米颗粒离心，保留沉淀，得到DNA-金球复合物探针。

9.一种端粒酶活性的直接检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：取如权利要求8所制备的DNA-金球复合物探针，加入TRAP溶液和反应碱基dNTP，混合均匀，在37℃条件下反应；

步骤(2)：在反应一段时间后，加入SDS溶液终止端粒酶的延伸反应，在降温后，离心去除上清液，使用超纯水溶液复溶，重复三次；

步骤(3)：将获得不同时间梯度下的端粒酶延伸的DNA-金球复合物产物，使用Tris溶液复溶，然后使用直径20nm的氮化硅纳米孔传感器对其进行检测，获得不同时间梯度下的端粒酶延伸端粒DNA序列长度的检测信号，从而获得端粒酶活性。