[发明专利]一种高效分离人实体瘤相关中性粒细胞的方法在审
| 申请号： | 202110155432.X | 申请日： | 2021-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN112941024A | 公开（公告）日： | 2021-06-11 |
| 发明（设计）人： | 金勋;徐星 | 申请（专利权）人： | 天津医科大学肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N5/0787 | 分类号： | C12N5/0787 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 陈巍 |
| 地址： | 300202 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 分离 实体 相关 中性 粒细胞 方法 | ||
1.一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，包括利用木瓜蛋白酶介导的肿瘤组织分离制备单细胞悬液与CD66B介导的流式细胞术分析单细胞悬液相结合获取中性粒细胞的步骤。
2.如权利要求1所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，木瓜蛋白酶介导的肿瘤组织分离制备单细胞悬液具体包括以下方法步骤：
将脱氧核糖核酸酶和木瓜蛋白酶混合液加入肿瘤中混合，于37℃孵育1-45min，离心收集细胞颗粒；
将所述细胞颗粒重悬于卵粘蛋白抑制剂-白蛋白中，再用碎片去除溶液处理，之后离心，收集沉淀并用PBS/无菌水混合液裂解，获取单细胞悬液。
3.如权利要求2所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，所述脱氧核糖核酸酶和木瓜蛋白酶混合液是脱氧核糖核酸酶和木瓜蛋白酶按体积比1:1-1:20混合而成；
按肿瘤质量计，所述脱氧核糖核酸酶和木瓜蛋白酶混合液按100-500μL/g的浓度加入肿瘤中。
4.如权利要求2所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，离心条件为：1000rpm离心5min。
5.如权利要求2所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，PBS/无菌水混合液为PBS与无菌水按体积比1:1-1:5混合而成。
6.如权利要求1所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，CD66B介导的流式细胞术分析单细胞悬液包括以下步骤：将所制备的单细胞悬液离心后收集细胞颗粒，并将细胞颗粒重悬于FBS-PBS溶液中，室温下用人BD Fc阻断剂阻断10min，依次洗涤、染色、再洗涤细胞后，用流式细胞仪检测CD66B+/CD15+细胞比例，并分选CD66B+中性粒细胞。
7.如权利要求6所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，所述离心条件为：1500rpm离心5min。
8.如权利要求1所述的一种高效分离人实体瘤中性粒细胞的方法，其特征在于，所述实体瘤包括脑胶质瘤。
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