[发明专利]一种蚊媒病毒的检测方法

说明书

本发明提供了一种蚊媒病毒的检测方法，其包括如下步骤：将待测样本加入到PCR反应体系中进行PCR扩增反应，得到PCR产物；其中PCR反应体系中包括JEV、DENV、CHIKV、ZIKV、YFV和RVFV引物中的至少两种；选择不同的羧基化荧光编码微球，分别包被探针，制备微球混合液得到偶联核酸探针的混合微球，其中包被的探针与PCR反应体系中的引物对应；将PCR产物与偶联核酸探针的混合微球进行杂交，并加入含链亲和素‑藻红蛋白的核酸检测缓冲液，孵育后加入终止反应液，然后进行液相芯片检测。采用本发明的技术方案，检测效率高，能同时对引起蚊媒传染病的多种病原体进行快速、准确的检测，具有良好的特异性和灵敏性。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种蚊媒病毒的检测方法。

背景技术

蚊媒传染病是由携带病原体的蚊虫叮咬引起的自然疫源性疾病，常见的有流行性乙型脑炎、登革热、黄热病、寨卡病毒病、基孔肯亚热等，给人类健康造成极大的威胁，严重影响正常的社会秩序和广大群众的日常生活，是重要的公共卫生问题。我国已将流行性乙型脑炎和登革热列为法定乙类传染病。蚊媒传染病具有传播力强，流行面广等特点，全球化经济的发展，极大地促进了国际贸易和旅游业的快速发展，随着国际间人员流动、交通往来和货物贸易日益频繁，极大地增加了蚊媒疾病在国际间传播扩散的可能性，使得原本局限于一个地域或国家内的疾病突破地域的界限，引起世界范围内的广泛传播与流行。引起蚊媒传染病的病毒种类较多，但引发的临床症状相似，如都有发热、皮疹、关节痛等症状，给疾病的快速诊断造成了相当的困难。因此，预防和控制蚊媒传染病的关键之一就在于对蚊媒病毒的快速、准确检测。

现有的蚊媒病毒的检测方法，只能对每一种病毒进行一一检测，而蚊媒病毒的种类较多，造成检测工作量大，时间长，效率低。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种蚊媒病毒的检测方法，可以同时对多种蚊媒病毒同时进行检测，实现了一次检测筛查多种蚊媒病毒的效果，提高了检测效率。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种蚊媒病毒的检测方法，其包括如下步骤：

步骤S1，将待测样本核酸加入到PCR反应体系中进行PCR扩增反应，得到PCR产物；

其中，所述PCR反应体系中包括JEV引物、DENV引物、CHIKV引物、ZIKV引物、YFV引物和RVFV引物中的至少两种，所述JEV引物的序列如SEQ ID No.1～2所示，所述DENV引物的序列如SEQ ID No.4～5所示，所述CHIKV引物的序列如SEQ ID No.7～8所示，所述ZIKV引物的序列如SEQ ID No.10～11所示，所述YFV引物的序列如SEQ ID No.13～14所示，所述RVFV引物的序列如SEQ ID No.16～17所示；

步骤S2，选择不同的羧基化荧光编码微球，分别包被JEV探针、DENV探针、CHIKV探针、ZIKV探针、YFV探针和RVFV探针中的至少两种，制备微球混合液得到偶联核酸探针的混合微球，其中包被的探针与PCR反应体系中的引物对应；

其中，所述JEV探针的如SEQ ID No.3所示，所述DENV探针的序列如SEQ ID No.5所示，所述CHIKV探针的序列如SEQ ID No.9所示，所述ZIKV探针的序列如SEQ ID No.12所示，所述YFV探针的序列如SEQ ID No.15所示，所述RVFV探针的序列如SEQ ID No.18所示；

步骤S3，将PCR产物与偶联核酸探针的混合微球进行杂交，并加入含链亲和素-藻红蛋白的核酸检测缓冲液，孵育后加入终止反应液，然后进行液相芯片检测，对荧光信号值进行分析，得到结果。

其中，包被的探针与PCR反应体系中的引物对应指JEV探针与JEV引物对应，DENV探针与DENV引物对应，CHIKV探针与CHIKV引物对应，ZIKV探针与ZIKV引物对应，YFV探针与YFV引物对应，RVFV探针与RVFV引物对应。