[发明专利]一种非洲猪瘟病毒一体化核酸检测卡盒

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒一体化核酸检测卡盒，包括盒体，盒体内从上至下依次设有裂解腔、第一清洗腔和第二清洗腔，其中裂解腔连通至盒盖，第二清洗腔连通至盒体外侧底部设置的反应腔；所述裂解腔、第一清洗腔、第二清洗腔和反应腔的两两相连区间分别设置有柱塞孔方向垂直于连接方向的柱塞，柱塞的柱塞孔内设有疏水性液态封闭材料；所述反应腔内设有扩增反应液；所述反应腔中设有可熔性材料层，可溶性材料层内包埋有非洲猪瘟病毒VP72基因的引物探针混合液。本发明可以在相对较低成本的情况下，快速一体化地对非洲猪瘟病毒进行PCR扩增及检测，解决现行技术重复性差、检测方法耗时、操作复杂等问题。

技术领域

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒一体化核酸检测卡盒，属于医学检测技术领域。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征，对所有年龄的猪都有影响，且易感猪群的病死率高达100％，对养猪业危害严重，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的A类动物疫病。

ASFV属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)唯一成员，具有双层囊膜结构，为线性双链DNA，存在1个血清型、22个基因型，其基因组长约170kb～193kb，可编码150多个开放阅读框，成熟病毒粒子中含有50种以上结构蛋白。

ASF在临床表现上不易与猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合症区分，因此对疑似发病猪进行快速鉴别检测，此外ASF缺乏有效的疫苗，其防控有依赖于快速、准确的诊断。因此，建立一种快速、准确地检测该病毒的方法以便能及时采取正确防控措施、减少经济损失。

ASFV严重威胁养猪业的健康生产。不仅威胁到食品安全，对供应链中养殖者和其他环节的参与者也产生重大威胁，而且因非洲猪瘟引发的贸易限制对国际贸易也会产生重大影响。

目前对非洲猪瘟的检测方法主要有ELISA法、胶体金法、核酸检测法。具体如下：

(1)ELISA法：ELISA方法高通量、检测快速、操作简单，是目前常用的免疫学诊断技术，可用于猪群中ASFV感染的大规模调查，但作为血清学检测技术，该方法具有一定的滞后性，无法对ASFV的早期感染做出诊断。

(2)胶体金法：胶体金试纸检测方法是以胶体金作为示踪标志物，利用层析技术实现抗原抗体特异性检测的一种新型的免疫检测技术。该方法具有快速、灵敏、特异等优点，尤其适合临床的快速诊断，但该方法的敏感性较高，易出现假阳性。

(3)核酸检测法：通过对病毒DNA的同源性比较，可在其基因序列的保守区(如VP72蛋白基因)设计出能对非洲猪瘟病毒进行特异性扩增的引物，通过PCR扩增将非洲猪瘟病毒从其它病毒中鉴别出来。改方法灵敏度高，但是存在易污染、操作时间长、需要特定仪器设备等局限性。

采用上述方法存在检测周期长、操作过程繁琐、灵敏度低、特定的仪器设备昂贵等缺点。尽管近几年，市场上出现多家特异性荧光探针PCR法检测非洲猪瘟病毒核酸试剂盒，以检测待测样本中的非洲猪瘟病毒核酸，但这些试剂盒对于基层检测实验室具有一些局限性：1)要求专业人员和二级生物安全实验室；2)特定的核酸提取方法和条件，易污染且延长操作时间，为此开发出一个省时省力的非洲猪瘟病毒全自动核酸提取扩增检测分型卡盒对基层检测机构来说势在必行。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种非洲猪瘟病毒一体化核酸检测卡盒。它可以在相对较低成本的情况下，快速一体化地对非洲猪瘟病毒进行PCR扩增及检测，解决现行技术重复性差、检测方法耗时、操作复杂等问题。