[发明专利]牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒有效
| 申请号： | 202110156326.3 | 申请日： | 2021-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN112853000B | 公开（公告）日： | 2022-07-05 |
| 发明（设计）人： | 赵晓民;童德文;王凯丽;刘志豪 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 范巍 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒性 腹泻 病毒 冠状病毒 轮状病毒 三重 rpa 检测 试剂盒 | ||
1.一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测引物组，其特征在于：该RPA检测引物组包括牛病毒性腹泻病毒反转录本扩增引物对P1、牛冠状病毒反转录本扩增引物对P2以及牛轮状病毒反转录本扩增引物对P3；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物Fv1：5'-GGTGAGTTCGTTGGATGGCTGAAGCCCTGAGTACA-3'
下游引物Rv2：5'-GATTTTTAGTAGCAATACAGTGGGCCTCTGCAGCA-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物Fc1：5'-CAGCGTGTTGATGAGAACGGTGATAAATTAG-3'
下游引物Rc2：5'-GCCTACTAAGCCTACCTCCACCAATTTGTCTGC-3'；
所述引物对P3的核苷酸序列为：
上游引物Fr2：5'-CCAAACATTTTCCCTTACTCAGCGTCATTCAC-3'
下游引物Rr3：5'-CCAGCGACCTGAATTTCTGATCCCGCATTGAGCC-3'。
2.一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括RPA检测引物组，所述RPA检测引物组包括牛病毒性腹泻病毒反转录本扩增引物对P1、牛冠状病毒反转录本扩增引物对P2以及牛轮状病毒反转录本扩增引物对P3；
所述引物对P1的核苷酸序列为：
上游引物Fv1：5'-GGTGAGTTCGTTGGATGGCTGAAGCCCTGAGTACA-3'
下游引物Rv2：5'-GATTTTTAGTAGCAATACAGTGGGCCTCTGCAGCA-3'；
所述引物对P2的核苷酸序列为：
上游引物Fc1：5'-CAGCGTGTTGATGAGAACGGTGATAAATTAG-3'
下游引物Rc2：5'-GCCTACTAAGCCTACCTCCACCAATTTGTCTGC-3'；
所述引物对P3的核苷酸序列为：
上游引物Fr2：5'-CCAAACATTTTCCCTTACTCAGCGTCATTCAC-3'
下游引物Rr3：5'-CCAGCGACCTGAATTTCTGATCCCGCATTGAGCC-3'。
3.根据权利要求2所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，各引物的工作浓度均为5～20μM。
4.根据权利要求3所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，根据引物对扩增片段的大小差异，扩增片段最小的引物对P3在建立的RPA扩增反应体系中的含量大于扩增片段较大的引物对P1和P2在该反应体系中的含量；扩增片段较小的引物对P1在所建立的RPA扩增反应体系中的含量大于扩增片段最大的引物对P2并且小于扩增片段最小的引物对P3在该反应体系中的含量。
5.根据权利要求3所述一种牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛轮状病毒的三重RPA检测试剂盒，其特征在于：所述RPA检测引物组中，Fv1:Rv2:Fc1:Rc2:Fr2:Rr3的用量体积比为(1.1～1.2):(1.1～1.2):(1.0～1.1):(1.0～1.1):(1.2～1.3):(1.2～1.3)。
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