[发明专利]一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法

权利要求书

1.一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，包括以下步骤：

(1)将德氏兜兰种子接种于萌发培养基上，在萌发光环境下诱导种子萌发，得到原球茎；

所述萌发培养基为含香蕉80～100g/L、6-苄基腺嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述萌发培养基的pH值为5.8～6.2；

所述萌发光环境为：先进行遮光培养20～30d，然后进行间歇光照培养；所述间歇光照培养时所用的光源为复合波长的日光灯，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；

(2)将所述步骤(1)得到的原球茎接种于分化培养基上，在分化光环境下培养，得到小苗；

所述分化培养基为含硝酸银0.2～0.5mg/L、6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述分化培养基的pH值为5.8～6.2；

所述分化光环境为：光质为波长475±5nm的蓝光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；

(3)将所述步骤(2)得到的小苗接种于壮苗与生根培养基上，在壮苗与生根光环境下培养获得完整植株；

所述壮苗与生根培养基为含硝酸银0.5～1.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.2～0.5mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L、琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述壮苗培养基的pH值为5.8～6.2；

所述壮苗与生根光环境为：光质为波长660±5nm的红光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；

(4)将所述步骤(3)得到的植株进行炼苗，再经移栽后得到德氏兜兰种苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中德氏兜兰种子由蒴果经消毒处理后切开得到；所述蒴果在消毒处理前进行低温沉积。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低温沉积的温度为0～10℃，所述低温沉积的时间为20～30d。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述蒴果为德氏兜兰花朵开放的第10～15d时进行异株人工授粉获得。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述异株人工授粉为：选取花朵完全开放的不同单株为父母亲本，把父母亲本花朵唇瓣的兜囊剪掉，然后将父本的花粉囊涂抹在母本的柱头面上。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述消毒处理包括：将蒴果在自来水下用软毛刷刷洗掉外表的灰尘和杂物，再用体积分数70～80％的酒精浸泡60～120s后，无菌水漂洗1～2次，然后用质量分数0.1～0.2％的升汞溶液消毒10～15min，无菌水漂洗4～5次。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的萌发培养、步骤(2)中的分化培养和步骤(3)中的生根培养的温度独立地为25～27℃。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的炼苗在自然光下进行，炼苗的时间为10～15d。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的移栽后的栽培基质包括植金石、松树皮和泥炭土。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述植金石、松树皮和泥炭土的体积比为1:(4～5)：1。