[发明专利]一种PSAP基因在制备检测猪妊娠早期胚胎死亡产品中的应用

说明书

本发明涉及生物分子标志物技术领域，特别涉及一种PSAP基因在制备检测猪妊娠早期胚胎死亡产品中的应用。本发明通过Illumina测序、差异基因筛选、生物信息学分析及qRT‑PCR等方法，确定了早期妊娠过程中猪胚胎发生的自发性死亡与母胎界面的免疫反应活性减弱相关，并进一步筛选并确定了PSAP基因可以作为早期妊娠猪胚胎自发死亡分子标志物。相比于传统的观察法，利用PSAP基因可以更加精确的度量早期妊娠过程中自发性死亡的胚胎，为研究胚胎发育过程的调控及胚胎自发死亡调控、子宫内膜调控等分子机制的科研工作者们提供新的手段。

技术领域

本发明涉及生物分子标志物技术领域，特别涉及一种PSAP基因在制备检测猪妊娠早期胚胎死亡产品中的应用。

背景技术

母猪的窝产仔数在一定程度上决定了一头母猪的生产效益，因此，母猪妊娠过程中胚胎的自发死亡在养猪业中一直备受关注，如何减少胚胎的自发死亡、提高母猪窝产仔数成了各国科研工作者们亟需解决的问题。大约有20～45％的猪胚胎会在妊娠的不同阶段自发性死亡，尤其在早期妊娠过程中，约在妊娠的第12至30天，更是有20～30％的胚胎会自发死亡。如何准确辨别早期胚胎发育是否正常对研究胚胎发育过程的调控及胚胎自发死亡调控分子机制的科研工作者们至关重要。

由于猪胎盘是一种特殊的非侵袭性上皮绒毛膜胎盘，胎盘通过绒毛膜附着于母体子宫上皮而形成，胚胎与母体之间属于并置关系，母体和胎儿之间的6层组织将血液供应分离开，为了避免母体的免疫排斥反应，母胎界面需维持特定的免疫反应活性使得胎儿能够正常发育。神经营养因子鞘脂激活蛋白原(PSAP)是溶酶体中特定鞘脂水解酶的激活剂，被发现在淋巴组织中大量表达，可能在免疫反应中扮演重要功能。

目前确定早期妊娠过程中自发死亡的猪胚胎主要是通过解剖来观察胚胎的发育状态，包括胚胎的长度、重量等。但是观察法经常会造成一些不可避免的误差：例如由于操作者自身的原因造成的误差或某些妊娠早期发育中的胚胎已经或将要死亡但在屠宰时肉眼还难以辨别造成的误差。对于某些研究胚胎发育调控机制的科研工作者，胚胎是否发育正常对研究结果十分重要，因此提出一种分子标志物，在一定程度上可以辅助辩别胚胎是否正常发育。

此外，对于研究子宫内膜调控的科研工作者来说，由于发育妊娠早期的子宫内膜大体一致，肉眼难以辩别出差距，不同部位的子宫内膜其内在基因表达模式又存在显著不同，因此，提供一种分子标志物来辅助辩别采集的子宫内膜状态也是十分必要。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种PSAP基因在制备检测猪妊娠早期胚胎死亡产品中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种检测猪妊娠早期胚胎死亡的引物。

本发明的再一目的在于提供上述引物的应用。

本发明的第四个目的在于提供一种检测猪妊娠早期胚胎死亡的试剂盒。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种PSAP(鞘脂激活蛋白原)基因在制备检测猪妊娠早期胚胎死亡产品中的应用；

所述的检测猪妊娠早期胚胎死亡产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片检测猪妊娠早期胚胎死亡的产品；

所述的通过RT-PCR检测猪妊娠早期胚胎死亡的产品包括至少一对特异扩增PSAP基因的引物；

所述的通过实时定量PCR检测猪妊娠早期胚胎死亡的产品包括至少一对特异扩增PSAP基因的引物；

所述的通过免疫检测检测猪妊娠早期胚胎死亡的产品包括：与PSAP基因编码的蛋白(PSAP蛋白)特异性结合的抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体；

所述的通过原位杂交检测猪妊娠早期胚胎死亡的产品包括：与PSAP基因的核酸序列杂交的探针；