[发明专利]一种抗OXA-23型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供一种抗OXA‑23型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗OXA‑23型碳青霉烯酶抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定；获得的抗OXA‑23型碳青霉烯酶抗体能够用于检测OXA‑23型碳青霉烯酶，效价达到了1:640000以上，将其制备成体外诊断试剂盒或微流体芯片，能够用于耐药菌株的早期分型，指导用药，辅助临床感染控制和治疗，对提高我国的医疗卫生水平具有重要意义。

技术领域

本发明属于抗体制备技术领域，尤其是涉及一种抗OXA-23型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

背景技术

在β-内酰胺类抗生素中，碳青霉烯类具有最广泛的抗菌活性，能够抵抗绝大部分β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶的水解作用，并且能够减弱染色体介导的Amp C酶的作用。不动杆菌对许多抗生素如β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等均有一定的耐药性，而碳青霉烯类抗生素对不动杆菌一直具有较好的抗菌活性。但随着临床上碳青霉烯类抗生素的广泛应用，鲍曼不动杆菌对其耐药率在逐年上升。近年不断有携带blaOXA-23的不动杆菌导致院感的报道。有文献报道国内耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌80％为产OXA-23 型碳青霉烯酶，使临床上耐碳青霉烯类药物的不动杆菌的治疗十分困难。据2011年卫生部耐药性监测网CHINET数据显示，我国鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为56.8％和58.7％，表明耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌给临床抗感染治疗带来严峻的挑战。

实验室检测碳青霉烯酶的方法众多。主要包括改良Hodge试验、Carba NP试验、改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制剂增强试验、免疫金标试验以及分子生物学方法等。免疫诊断试剂是体外诊断试剂中发展最快的的细分领域，利用抗原与抗体之间的特异性结合进行定性或定量检测。

发明内容

本发明提供一种抗OXA-23型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

本发明采用的技术方案是：一种抗OXA-23型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，命名为HB12，保藏编号为CGMCC No.20285；或者命名为FA2，保藏编号为CGMCC No.20286。

一种抗OXA-23型碳青霉烯酶抗体，命名为抗体HB12，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区序列的CDR区中包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的三个序列，重链可变区序列的CDR区中包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的三个序列；

SEQ ID NO:1

KASQDVSIAVA（CDR-L1）

SEQ ID NO:2

WASTRHT（CDR-L2）

SEQ ID NO:3

QQHYSTPYL（CDR-L3）

SEQ ID NO:4

GYTFTSYWMY（CDR-H1）

SEQ ID NO:5

EIYPTNGRTNYNEKFKT（CDR-H2）

SEQ ID NO:6

YYYGSYAMDY（CDR-H3）

或者，