[发明专利]抗IMP型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供一种抗IMP型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗IMP型碳青霉烯酶抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定；获得的抗IMP型碳青霉烯酶抗体能够用于检测IMP型碳青霉烯酶，效价达到了1:640000以上，将其制备成体外诊断试剂盒或微流体芯片，能够用于耐药菌株的早期分型，指导用药，辅助临床感染控制和治疗，对提高我国的医疗卫生水平具有重要意义。

技术领域

本发明属于抗体制备技术领域，尤其是涉及一种抗IMP型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

背景技术

碳青霉烯类抗生素是控制临床致病菌感染最有效的药物之一，产碳青霉烯酶生物（CPO）和耐碳青霉烯肠杆菌因其广谱耐药性成为了一个全球公共卫生问题，患者的治疗方法非常有限。肠杆菌科细菌是院内感染和社区获得性感染的重要病原菌。近年来由于头孢菌素的广泛应用，肠杆菌科中产超广谱β－内酰胺酶（extended spectmbeta-lactamases,ESBLs）及Amp C酶的菌株比例呈明显上升趋势，治疗此类菌株感染的首选药物是碳青霉稀类抗菌药物。但是，伴随着亚胺培南和美罗培南在临床上的大量使用，耐碳青霉炼类肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistanctenterobacteriaceae，CRE）数量也呈逐年上升趋势。临床研究表明CRE菌株对多种抗菌药物耐药，因此临床治疗药物的可选择范围明显受到限制。此外，感染患者往往伴有并发疾病，给临床感染控制和治疗带来极大困难。

IMP型酶是获得性MBLs中非常常见的一种，属Bush分类3a亚群，能水解几乎所有β-内酰胺类抗菌药物，其水解活性不被β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦等抑制，但碳青霉烯可被金属螯合物如EDTA、巯基化合物等抑制，在缺乏其他共存的耐药机制时，产IMP型碳青霉烯酶的菌株仍对单环类抗菌药物（ATM等）敏感。

实验室检测碳青霉烯酶的方法众多。主要包括改良Hodge试验、Carba NP试验、改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制剂增强试验、免疫金标试验以及分子生物学方法等。免疫诊断试剂是体外诊断试剂中发展最快的的细分领域，利用抗原与抗体之间的特异性结合进行定性或定量检测。

发明内容

本发明提供一种抗IMP型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

本发明采用的技术方案是：一种抗IMP型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，命名为1AA4，保藏编号为CGMCC No.20288；或者命名为AH9，保藏编号为CGMCC No.20287。

一种抗IMP型碳青霉烯酶抗体，命名为抗体1AA4，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区序列的CDR区中包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的三个序列，重链可变区序列的CDR区中包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的三个序列；

SEQ ID NO:1

RSSQSLLDSGGKTYLN（CDRL1）

SEQ ID NO:2

YLVSKL（CDRL2）

SEQ ID NO:3

FQYTHFPQCT（CDRL3）

SEQ ID NO:4

AASGFTFSDYYMY（CDRH1）

SEQ ID NO:5

VAIISDGGSYTYYPDSVKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6