[发明专利]一株副溶血性弧菌裂解性噬菌体vB_VpP_DE17及其应用

说明书

本发明公开一种副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_DE17，其对副溶血性弧菌具有强烈的裂解作用，并且能够感染11种O抗原中的10种副溶血性弧菌。该噬菌体可以通过特异性宿主进行扩增，产生效价高的发酵产物，并且能够耐受60℃高温、耐受pH 5.0~pH 10.0。其最佳侵染复数（MOI）较广，在MOI为1~0.1的范围内，具有较强的防控副溶血性弧菌效果。因而，该副溶血性弧菌噬菌体可用于防控在水产养殖过程中由副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺坏死综合症，具体较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及疾病防治领域，具体涉及副溶血性弧菌裂解性噬菌体及其应用。

背景技术

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐性的革兰氏阴性菌，属于弧菌科，弧菌属，是一种人畜共患病原菌。人被副溶血性感染后，主要引起的症状有腹泻、发烧、肠胃炎等，严重可致死。副溶血性弧菌主要广泛分布在海水及鱼、虾、蟹、贝等水产品中，也是多数水产养殖过程中需要重点防控的病原菌。

20世纪初至今，水产养殖过程中依旧是使用抗生素对副溶血性弧菌进行防控而长期使用、滥用抗生素导致病原菌的耐药性不断增强，抗生素的广谱消杀的特性对原生微生物生态系统造成不可逆伤害，抗生素的残留问题最终也会对人体健康造成威胁。

随着以上问题日益严重，科研人员将再次着眼于利用噬菌体治疗对抗病原菌。噬菌体是一种特殊的细菌病毒，被认为是对抗多药耐药细菌的替代品。自从20世纪初发现噬菌体以来，已经报道了一些使用噬菌体疗法成功治疗细菌感染的方法案例(林业杰等，副溶血性弧菌噬菌体的生物学特性研究，海峡预防医学杂志，1998年第1期)。一些经FDA(U.S.Food and Drug Administration)批准的噬菌体类产品，已经被用投入生产应用。噬菌体分为2个大类：温和噬菌体和烈性噬菌体。其中烈性噬菌体通过特异性侵染宿主，在利用宿主细胞的营养物质进行繁殖，最终使细胞裂解来杀死宿主，只需通过4次感染周期，一个噬菌体颗粒就可以使十亿个宿主细胞裂解死亡，具有潜在应用价值。

目前噬菌体的应用主要受到以下几个方面的限制。

首先，噬菌体特异性侵染菌株的特性，是其能够有效在生产中应用的主要限制因素。一个病症的发生，通常并不是由单单一株病原菌引起的，会是多种病原菌共同导致，而且对于不同环境或者个体中发生的相同病原菌感染，可能存在病原菌的菌株差异。

其次，一些噬菌体具有溶源能力，在溶源噬菌体，即温和噬菌体的生命周期中，其DNA主要是以整合到细菌的染色体上的方式，与细菌一起共同繁殖，只有在遇到逆境胁迫的情况下，才会进入裂解周期。这将带来两个问题，第一是不能快速的杀死病原菌，第二会引起基因水平转移，可能将细菌致病基因整合到噬菌体基因组上，从而导致致病基因在菌株间传播。

最后，噬菌体制剂的稳定性也会影响其实际应用，一方面是噬菌体制剂在运输与销售过程中，必须保持噬菌体效价在有效范围内，另一方面是噬菌体在所投放应用的环境中，能够稳定存活，并起到有效作用。

目前缺乏能够同时解决以上应用缺陷并且遗传信息和理化性质清晰的副溶血性弧菌噬菌体。

发明内容

本发明是针对现有的不足，通过研究筛选提供一种新型的副溶血性弧菌噬菌体，该噬菌体具有较广的宿主谱，能够裂解多种O抗原副溶血性弧菌，并对副溶血性弧菌具有较好的消杀与预防作用，不含有溶源性基因和毒力基因，能够用于虾添加剂、水体消毒剂的研发。

本发明提供一种具有宽裂解谱的副溶血性弧菌噬菌体(Vibrioparahaemolyticus bacteriophage)，菌株的保藏编号为GDMCC No：61188-B1。该噬菌体采用沉降-过滤方法从广州黄沙水产市场下水道水样中分离得到，所述副溶血性弧菌噬菌体具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列表示的基因组，其pH的耐受范围是pH 5～pH 10，可耐受60℃高温，被命名为vB_VpP_DE17(以下简写为DE17)。