[发明专利]一种能分泌猪RNAPII单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种能分泌猪RNAPII单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用。本发明利用骨髓瘤细胞融合技术制备筛选产猪RNAPⅡ单克隆抗体的杂交瘤细胞。所获得的单克隆抗体具有效价较高、不存在批次之间的差异、特异性强、成本低廉等特点。与商业化鼠源单抗进行比较发现，本申请的单克隆抗体具有良好的ChIP效果；在ChIP‑seq实验中，与商业单抗具有高度相关(r＝0.89)，表明二者具有良好的一致性；在ChIP‑seq实验中富集曲线更加陡峭且集中，表明其RNAPII富集效果强于商业单抗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种能分泌猪RNAPII单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用。

背景技术

RNA聚合酶Ⅱ(英语：RNA polymerase II，亦被称为RNAPⅡ或PolⅡ)是一种存在于真核生物细胞中的酶。RNA聚合酶Ⅱ是含12个亚基的550kDa大的复合物，是真核细胞细胞核中发现的三种RNAP酶之一，也是RNA聚合酶中被研究得最多的一类。RNAPII大亚基的羧基末端(Rbp1)具有独特的结构，由Y-S2-P-T-S5-P-S序列的七段重复序列组成，称为羧基末端结构域。在高等真核生物中，七肽重复52次，丝氨酸2和丝氨酸5是激酶活性的靶点，并经历动态磷酸化循环。

RNA聚合酶Ⅱ结合到基因上游的启动子并开始转录前需要大量转录因子。它催化脱氧核糖核酸转录，将DNA转录成信使RNA(mRNA)和大多数小核RNA(snRNA)和microRNA前体的多蛋白复合体。

现有技术中RNA聚合酶Ⅱ检测结果的准确性很大程度上由抗体性能所决定，一种特异性强、结合速度快、无批次差异的抗体将会极大地提高检测的准确性。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种能分泌猪RNAPII单克隆抗体的杂交瘤细胞及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。本发明研究RNA POLR2A单克隆抗体及其杂交瘤细胞株的制备。

本发明是这样实现的，一种能分泌猪RNAPII单克隆抗体的杂交瘤细胞，保藏编号为CCTCC NO:C202161，已于2021年2月3日保藏至中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072；培养物名称(分类命名)：杂交瘤细胞株PP2。

一种猪RNAPⅡ的单克隆抗体，由上述的杂交瘤细胞产生。所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸长度分别是217KD和63KD。

如上述的一种猪RNAPⅡ的单克隆抗体的制备方法，将上述的杂交瘤细胞腹腔注射至动物腹腔，收取腹水，离心，收集得到单克隆抗体。

如上述的杂交瘤细胞在制备猪RNAPⅡ的单克隆抗体中的应用。

如上述的猪RNAPⅡ的单克隆抗体在检测RNA聚合酶Ⅱ中的应用。

如上述的猪RNAPⅡ的单克隆抗体在制备RNA聚合酶Ⅱ检测试剂中的应用。

如上述的猪RNAPⅡ的单克隆抗体在制备RNA聚合酶Ⅱ检测试剂盒中的应用。

如上述的猪RNAPⅡ的单克隆抗体在制备RNA聚合酶Ⅱ检测试纸条中的应用。

本发明提供了一种抗RNAPⅡ蛋白单克隆抗体的制备方法，综合线性表位、亲水性、免疫原性和表位暴露性数据，选取RNAPⅡ蛋白的1-260aa表达蛋白和多肽C-YSPTSPSYSPTSPS，分别溶解于PBS溶液中，巯基偶联到KLH上，作为免疫原；巯基偶联到BSA上，作为筛选原。

优选地，所述单克隆抗体是小鼠IgG2A型单克隆抗体。

优选地，所述骨髓瘤细胞是SP2/0骨髓瘤细胞。

优选地，所用实验小鼠为雌性Balb/C小鼠。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：