[发明专利]Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用

说明书

本发明公开了Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。所述Lgr5的C端具有如SEQ NO.1所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸的核苷酸序列。首先构建了Lgr5、Lgr5‑C（Lgr5上823位氨基酸后全部截断）和Lgr5‑190（Lgr5上190位氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸）的腺病毒，分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的作用机制，从而确定Lgr5基因对毛细胞的保护和支持细胞再生为毛细胞的作用机制，为治疗耳聋提供新的理论思路，代替助听器和人工耳蜗帮助患者恢复和重建听觉功能。

技术领域

本发明涉及耳蜗毛细胞的保护与再生技术领域，尤其涉及Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用。

背景技术

在哺乳动物中，听觉毛细胞和支持细胞仅在胚胎发育中产生，由于环境压力、耳毒性、遗传因素或老化导致的毛细胞缺失是永久性的，一旦受到损伤将会导致永久耳聋，内耳毛细胞的不可逆损伤是造成感音神经性聋的核心原因。目前临床上常用的助听器和人工耳蜗移植治疗虽然在一定程度上改善了患者的听力，但是其效果完全依赖于残留毛细胞的数量和质量；因此最理想的治疗感音神经性聋的方法是通过干细胞治疗使毛细胞再生达到耳蜗结构和功能的修复，从而在根本上恢复听力。在临床上助听器和人工耳蜗移植是当前恢复耳聋患者听觉功能的主要技术方法。助听器通过传声器将外界声音信号转变为电信号，输入放大器后将声压放大到1万乃至几万倍，再经耳机输出这个放大后的声信号。人工耳蜗通过外机接收声音语言信号,接收刺激器将这种信号转换成电信号传到植入体中的电极线上,再通过神经细胞接收电信号并将电信号传到大脑中。助听器和人工耳蜗移植虽然能帮助患者重建听觉功能，但是都是借助残存的毛细胞，存在一定的局限性，不能从根本上解决问题。

现有技术只能使部分支持细胞再生为毛细胞，再生效率不是特别高，并且参与这一过程的分子机制仍不是很清楚，这可能是多基因多信号通路相互作用的结果，需要后续的探索去说明究这一复杂的再生过程。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用，该方法首先构建了Lgr5、Lgr5-C(Lgr5 823位氨基酸后全部截断)和Lgr5-190(190位氨基酸发生点突变，由丙氨酸变为天冬氨酸) 的腺病毒，然后分别探究Lgr5基因的C末端和N末端对毛细胞的保护作用和内耳干细胞的再生作用，最后分别研究Lgr5基因的C末端和N末端在内耳中的具体作用机制，可直观的反映出Lgr5具有良好的促进内耳毛细胞再生的效果，为解决耳聋问题及后期的临床应用增加了有力的证据。

为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：

Lgr5基因在保护内耳毛细胞及促进支持细胞再生上的应用，所述Lgr5的C 端具有如SEQ NO.4所示的核苷酸序列，且N端的第190位具有编码丙氨酸(GCC) 的核苷酸序列。

SEQ NO.4(即823位后的核苷酸序列)

AATCCCCATTTTAAGGAGGATATGGGCAGCCTGGGAAAGCATACCCGTTTCTGGATGAGATCAAAACACGCGAGTCTGCTGTCCATTAACTCGGACGATGTTGAGAAACGGTCCTGTGAGTCAACCCAAGCCTTAGTA TCCTTTACCCACGCCAGCATAGCCTATGACTTGCCTTCCACTTCCGGGGCATCACCAGCTTACCCCATG ACTGAAAGCTGTCATCTCTCTTCAGTTGCATTTGTCCCATGTCTCTAG

SEQ NO.5(即823位后的氨基酸序列)

NPHFKEDMGSLGKHTRFWMRSKHASLLSINSDDVEKRSCESTQALVSFTHASIAYDLPSTSGASPAYPMTESCHLSSVAFVPCL