[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗草鱼IL-15Rα单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗草鱼IL‑15Rα单克隆抗体和应用，所述杂交瘤细胞株已于2021年01月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202135。本发明针对现有技术中草鱼IL‑15Rα单克隆抗体缺失的问题，采用重组草鱼IL‑15Rα的Sushi结构域蛋白作为抗原免疫小鼠，并筛选得到了一株可特异性分泌抗草鱼IL‑15Rα单克隆抗体的杂交瘤细胞株E7‑17，其分泌产生的单克隆抗体可特异性地识别草鱼IL‑15Rα蛋白，并且效价高，因此可用于特异性识别检测草鱼IL‑15Rα蛋白及草鱼IL‑15Rα阳性细胞，实现对草鱼IL‑15Rα阳性细胞的分离与功能研究，识别特异性高，反应灵敏。

技术领域

本发明属于蛋白检测技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗草鱼IL-15Rα单克隆抗体和应用。

背景技术

IL-15Rα，即IL-15受体α链，其可与IL-2/15β亚基和γ链亚基组成IL-15的异源三聚体受体。IL-2/15β亚基和γ链亚基亦可以与IL-2Rα组成IL-2的异源三聚体受体。IL-2Rα也被称为CD25，其在哺乳动物中主要表达于T细胞和B细胞。研究表明，CD25可作为哺乳动物Treg细胞和部分Breg细胞的一种特异性表面标志分子，Treg细胞和Breg细胞可以通过分泌一些抗炎细胞因子如IL-10、TGF-β和IL-35等发挥免疫抑制作用。

IL-15Rα和IL-2Rα基因在哺乳动物中位于同一条染色体且基因座的位置紧密相连，并且都具有Sushi结构域(Anderson et al.,1995,Functional characterization ofthe human interleukin-15 receptorαchain and close linkage of IL15RA and IL2RAgenes,Journal of Biological Chemistry,270(50):29862-29869.)。但是，IL-2Rα包含两个Sushi结构域，而IL-15Rα仅包含一个Sushi结构域。鱼类中目前仅发现IL-15Rα分子，体外实验证实其既可以与IL-15结合又可以和IL-2结合，并且其与IL-15的结合能力强于其与IL-2的结合。鱼类IL-15Rα分子既具有哺乳动物IL-15Rα类似的活性，又具有哺乳动物IL-2Rα类似的活性，且已有研究证实鱼类CD4⁺IL-15Rα⁺细胞具有类似于哺乳动物Treg细胞的功能。因此，鱼类IL-15Rα分子也被称为CD25-like(Wen et al.,2011,Identification ofTreg-like cells in Tetraodon:insight into the origin of regulatory T subsetsduring early vertebrate evolution,CellularMolecular Life Sciences,68(15):2615-2626.)。

Treg细胞和Breg细胞在维持机体的免疫平衡中发挥着重要的作用，检测其细胞比例可用于反映草鱼炎症反应过程。但是，特异性抗体的缺乏限制了草鱼Treg细胞和Breg细胞的检测。因此，急需发展准确、特异的IL-15Rα单克隆抗体用于检测草鱼Treg细胞和Breg细胞，为监测草鱼炎症过程提供参数指标。

发明内容

本发明针对现有技术中草鱼IL-15Rα单克隆抗体缺失的问题，提供了一种抗草鱼IL-15Rα单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述单克隆抗体可特异性地识别草鱼IL-15Rα蛋白，而不与草鱼的其他蛋白发生反应，并且效价大于64000，因此可用于特异性检测草鱼IL-15Rα蛋白，特异性高，反应灵敏。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：