[发明专利]一种检测鸭源性成分的引物对和探针及其试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种检测鸭源性成分的引物对和探针，并公开了根据该引物对和探针设计的试剂盒，该试剂盒包括RAA反应体系和LFD试纸条；所述RAA反应体系包括RAA反应通用干粉、Tris‑HCl缓冲液、上游引物YA‑F、下游引物YA‑R、探针YA‑PRO、样品DNA提取液、MgAcO、ddH₂O；所述LFD试纸条的质控线上带有亲和素‑胶体金特异性抗体，检测线上带有生物素抗体和荧光基团抗体。本发明基于重组酶介导等温核酸扩增技术侧流免疫技术，提出了一种新的鸭源性成分掺假现场检测方法，可实现肉眼结果的可视化检测，相较于其他检测方法，此方法检测灵敏度高，操作简便快速，无需专门设备，结果准确可以满足现场样本的检测，特别适合农贸市场、超市、批发市场等现场检测。

技术领域

本发明涉及一种检测鸭源性成分的引物对和探针及其试剂盒和应用，属于生物技术和食 品安全快速检测领域，特别涉及一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术-侧流免疫技术检测鸭 源性成分的引物对和探针及其试剂盒和应用。

背景技术

肉类掺假直接威胁消费者的健康，为了保护消费者的权益，避免不公平的市场竞争，提 供一种可靠、高效、快速、准确的方法，能够准确地从肉制品中鉴别出动物种类，防止肉品 变味的情况，势在必行。

目前，几种分析方法已被验证和开发用于筛选和监测肉类掺假，如光谱分析、电泳、酶 联免疫吸附试验(ELISA)、色谱分析等。应用最广泛的方法是聚合酶链反应(PCR)，包括常规PCR、实时PCR、引物多重PCR、PCR-rflp、高分辨率熔融(HRM)分析、PCR-测 序等。然而，现有的技术需要相当多的操作技能，昂贵的设备和漫长的过程，这些条件或资 源局限都限制了食品肉类的检测应用。

近年新发展起来的核酸等温扩增技术，主要有核酸依赖性扩增检测技术(Nuclearacid sequence-based amplification，NASBA)、环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification，LAMP)、依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependentIsothermal DNA Amplification，HDA)、滚环核酸扩增技术(rolling circleamplification，RCA)、重组酶聚合 酶扩增技术(Recombinase PolymeraseAmplification，RPA)、重组酶介导等温核酸扩增技术 (Recombinase AidedAmplification，RAA)等。其基本原理均是模仿体内核酸复制机制，由 各种蛋白酶参与反应，帮助DNA聚合酶复制DNA，以实现DNA的等温扩增。与PCR相比， 等温扩增技术使得核酸在恒温条件下得以扩增，摆脱了昂贵的热循环实验仪器，并且可在短 时间内实现目的片段的指数扩增，使在多种非实验室条件下进行核酸扩增检测成为现实。

重组酶辅助扩增联合侧流免疫技术(Recombinase Assisted Amplification-Lateral Flow Device，RAA-LFD)，即将重组酶辅助扩增技术(RAA)结合侧向流动免疫技术(LFD)的 一种联用技术。我们拟基于RAA-LFD技术，构建一种适合于检测现场(超市、肉市场等) 对肉品掺假快速检测的方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明目的是提供一种检测鸭源性成分的扩增引物对和探针。

本发明另一目的是根据扩增引物对和探针提供一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术- 侧流免疫技术检测鸭源性成分的试剂盒。

本发明另一目的是提供基于重组酶介导等温核酸扩增技术-侧流免疫技术检测鸭源性成 分的试剂盒的应用。

该试剂盒及其检测方法简便快速、适合于现场检测鸭源性成分，对操作人员的技术要求、 设备要求较低，适合现场快速检测，在食品安全的快速检测中有广阔的应用前景。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：