[发明专利]KRAS基因突变检测的引物探针组、试剂盒及其应用在审
申请号: | 202110172806.9 | 申请日: | 2021-02-08 |
公开(公告)号: | CN112795653A | 公开(公告)日: | 2021-05-14 |
发明(设计)人: | 张核子;陈伟虹;卢晓萍;操利超;张付瑶;丁世涛 | 申请(专利权)人: | 深圳市核子基因科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6886 | 分类号: | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 刘燚 |
地址: | 518055 广东省深圳*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | kras 基因突变 检测 引物 探针 试剂盒 及其 应用 | ||
1.KRAS基因突变检测的引物探针组,其特征在于,包括:
检测KRAS基因突变的引物对:
上游引物:5'-CCTGCTGAAAATGACTGAATATAAAC-3',
下游引物:5'-TCTATTGTTGGATCATATTCGTCCAC-3';
检测突变型KRAS基因的突变型探针,包括:
检测KRAS基因第12密码子G12D突变的G12D探针:5'-TACGCCATCAGCTC-3',
检测KRAS基因第12密码子G12V突变的G12V探针:5'-TACGCCAACAGCTC-3',
检测KRAS基因第12密码子G12S突变的G12S探针:5'-TACGCCACTAGCTC-3',
检测KRAS基因第12密码子G12C突变的G12C探针:5'-TACGCCACAAGCTC-3',
检测KRAS基因第12密码子G12A突变的G12A探针:5'-TACGCCAGCAGCTC-3',
检测KRAS基因第12密码子G12R突变的G12R探针:5'-TACGCCACGAGCTC-3',
检测KRAS基因第13密码子G13D突变的G13D探针:5'-TACGTCACCAGCTC-3';
检测野生型KRAS基因的野生型探针,包括:5'-TACGCCACCAGCTC-3'。
2.根据权利要求1所述的引物探针组,其特征在于,所述野生型探针和/或所述突变型探针进行了锁核酸修饰;
优选的,所述G12D探针的第5、7、8个碱基进行了锁核酸修饰,所述G12V探针的第4、7、8个碱基进行了锁核酸修饰,所述G12S探针的第7、8个碱基进行了锁核酸修饰,所述G12C探针的第4、7、9个碱基进行了锁核酸修饰,所述G12A探针的第5、8个碱基进行了锁核酸修饰,所述G12R探针的第5、7个碱基进行了锁核酸修饰,所述G13D探针的第5、7个碱基进行了锁核酸修饰,所述野生型探针的第6、7个碱基进行了锁核酸修饰。
3.根据权利要求1所述的引物探针组,其特征在于,还包括内参引物和内参探针;
优选的,所述内参引物包括检测ACTB基因的引物对:
上游引物:5'-CTTTCTGCATGTCCCCCGT-3',
下游引物:5'-AGTCCATCACGATGCCAGTG-3';
优选的,所述内参探针为检测所述ACTB基因的探针:5'-ATGTACGTTGCTATCCA-3'。
4.根据权利要求1至3任一项所述的引物探针组,其特征在于,所述探针的5'端标记有报告基团,所述探针的3'端标记有淬灭基团;
优选的,所述报告基团选自FAM、ROX、VIC、HEX、TET、JOE、NED、Cy5、Cy3;
优选的,所述淬灭基团选自BQH1、BHQ2、BHQ3、TAMARA、NFQ-MGB;
优选的,所述野生型探针和所述突变型探针的报告基团不同。
5.试剂盒,其特征在于,包括权利要求1至4任一项所述的引物探针组。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述引物探针组为引物探针混合液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述引物探针混合液中所述引物对的浓度为10~50μmol/L,所述突变型探针和所述野生型探针的浓度为1~20μmol/L。
8.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,还包括Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶、PCR缓冲液。
9.根据权利要求5至8任一项所述的试剂盒,其特征在于,还包括DNA提取试剂。
10.权利要求1至4任一项所述的引物探针组,或权利要求5至9任一项所述的试剂盒在制备癌症的预后试剂中的应用;
优选的,所述癌症选自胰腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌中的至少一种。
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