[发明专利]一种奶绵羊精液冷冻保存方法及其稀释液

说明书

本发明提供了一种奶绵羊精液冷冻保存方法及其稀释液，本发明的稀释液通过调整特定的配方用量，利用该稀释液对奶绵羊精液进行冷冻保存，解冻精子平均活率达到63.69％，解冻精子平均顶体完整率达到60.75％，解冻精子平均畸形率为14.27％，解冻精子平均质膜完整率达到46.97％，解冻精子子宫角输精情期受胎率达88.89％。表明采用本发明的稀释液得到的奶绵羊冻精在解冻后活率、顶体完整性、畸形率、质膜完整率、情期受胎率等重要指标方面均有保证，对于奶绵羊人工输精等生产应用具有重大价值。

技术领域

本发明涉及动物养殖技术领域，更具体地，涉及一种奶绵羊精液冷冻保存方法及其稀释液。

背景技术

在动物繁殖育种领域，人工输精是一种高效利用良种公畜繁殖性能的技术。与自然交配相比，人工输精技术的精液利用率更高，可以实现母畜批量化授精。人工输精可以使用鲜精和冻精。与鲜精相比，冷冻精液能够延长精液贮存时间，使精液不受时间、地域和种畜生命的限制，充分发挥优良种公畜的遗传潜力。同时冷冻精液也是建立动物精液基因库不可缺少的手段，特别是对稀有动物和濒危动物的保种具有重要的意义。

绵羊精液冷冻研究始于1937年，Bernstein等人用含9.2％甘油的稀释液将绵羊、兔、牛和猪等动物的精液保存于-20℃。近几十年来，通过对不同稀释液基础液(柠檬酸盐基、奶、乳糖基、蔗糖基、棉子糖基和Tris基等)、冷冻保护载体(甘油、乙二醇、DMSO、卵黄、大豆卵磷脂)、稀释液添加剂(抗氧化物质、精浆成分、单糖和二糖、脂肪酸)、稀释和平衡方法(一步稀释法、两步稀释法、不同平衡方式等)、冷冻形式(颗粒冻精、细管冻精)、冷冻方法(液氮熏蒸、程序化冷冻仪)和解冻方法的不断研究，绵羊冻精技术取得了长足进步。尽管如此，目前也仅有40～60％的精子在冻后仍能保留运动能力，其中只有20～30％的精子仍具备生物学功能。

绵羊奶的营养价值很高，可作为高端乳制品和保健品的原料，市场前景广阔。然而，我国历史上并无专门的乳用绵羊品种。目前的发展策略是从国外引进优良奶绵羊后与当地品种杂交，形成能够适应当地气候环境的高产奶绵羊品种。在此过程中人工输精和冷冻精液技术显得尤为重要。戴瑞奶绵羊是由新西兰引进的新品种奶绵羊，其产奶性能、产肉性能显著优于本地羊。在饲养过程中我们发现该品种抗病性能较差，较易发肺部疾病和关节炎，而健康状况对精液质量的影响不容忽略，因此适龄期的戴瑞奶绵羊精液质量较本地品种要差，适用于当地羊的冷冻精液稀释液并不完全适用于戴瑞奶绵羊。为使其快速扩繁，对其进行冻精研制显得尤为必要。

由于绵羊精子本身对温度特别敏感，精液在进行程序化冷冻过程中极易受到低温损伤，导致精子不能安全通过危险温区，使冻后活力下降以及解冻后精子的复苏率降低，进而造成人工授精后的妊娠率降低，严重阻碍了绵羊冷冻精液的推广应用，制约着优质绵羊品种的改良和育种进度。公开号为CN111226907A的中国发明专利提供了一种绵羊精液常温保存的稀释液的制备方法，但其针对的是当地品种羊，基于奶绵羊精液与本地羊敏感性的差异，且该稀释液是常温保存的稀释液，无法应用于奶绵羊精液的冷冻保存。因此，研发出适用于奶绵羊的精液冷冻技术具有相当的必要性。

发明内容

本发明旨在提供一种特定针对奶绵羊精液冷冻保存的稀释液及其保存方法，利用本发明提供的稀释液对奶绵羊精液进行冷冻保存，解冻精子成活率达到63.97％，解冻精子顶体完整率达到57.37％，解冻精子质膜完整率达到39.52％。表明采用本发明的稀释液得到的奶绵羊冻精在解冻后活率、顶体完整性、质膜完整性和畸形率等重要指标方面均有保证，对于奶绵羊人工输精等生产应用具有重大价值。

本发明的首要目的是提供一种奶绵羊精液冷冻保存稀释液。

本发明的另一目的是提供一种利用上述稀释液对奶绵羊精液冷冻保存的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：