[发明专利]一种构建瘦肉率高、生长快的优质猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用有效
| 申请号： | 202110175618.1 | 申请日： | 2021-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN112813101B | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;曾为俊;王磊;程锐;赵泽英;陶裴裴;黄彩云 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 瘦肉 生长 优质 移植 供体 细胞 基因 编辑 系统 及其 应用 | ||
1.一种用于猪MSTN、SST基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，包含Cas9表达载体、针对猪MSTN基因的gRNA表达载体以及针对猪SST基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO载体；所述的针对猪MSTN基因的gRNA表达载体表达 SEQ ID NO.32 所示的 gRNA，其靶点如 SEQID NO.20 所示,该表达载体由SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；所述的针对猪SST基因的gRNA表达载体表达 SEQ IDNO.51 所示的 gRNA，其靶点如 SEQ ID NO.39 所示，该表达载体由SEQ ID NO.43和SEQ IDNO.44所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得；所述的载体骨架pKG-U6gRNA，其质粒全序列如SEQ ID NO.3所示。
2.权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统在构建MSTN和SST基因敲除的猪重组细胞中的应用。
3.一种敲除MSTN和SST基因的猪重组细胞，其特征在于由权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。
4.权利要求3所述的重组细胞在构建MSTN和SST双基因敲除的克隆猪中的应用。
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