[发明专利]薯蓣皂素合成菌株构建及应用

权利要求书

1.一种重组菌，为在含有薯蓣皂素合成路径相关基因的底盘酵母菌中进行如下1)的改造，得到的重组菌：

1)使所述底盘酿酒酵母表达甾体22位羟化酶基因；

或使所述底盘酿酒酵母表达甾体22位羟化酶基因且提高所述底盘酿酒酵母的基因组中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-细胞色素P450还原酶SvvCPR基因的表达；

所述薯蓣皂素合成路径相关基因为3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶1基因tHMG1、α-氨基乙二酸还原酶基因Lys2、甲羟戊酸激酶基因ERG12、异戊烯基焦磷酸异构酶基因IDI1、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因ERG19、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因HMGR、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A基因ERG13、磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8、乙酰辅酶A酰基转移酶基因ERG10、鲨烯合酶基因AtSQS、法尼基焦磷酸合酶基因SmFPS、鲨烯环氧酶基因ERG1、甾醇26位羟化酶基因VcCYP94N、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-细胞色素P450还原酶基因SvvCPR、甾醇16，22双羟氧化酶基因DGCYP90G、甾醇7位还原酶基因StDWF5和/或甾醇24位还原酶基因GgDHCR24。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：所述甾体22位羟化酶基因来源于山藜芦、拟南芥、番茄或盾叶薯蓣。

3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于：

所述甾体22位羟化酶基因为如下1)-3)中任一种：

1)序列表中序列19的第482-1937位所示核苷酸编码的蛋白；

2)将1)进行一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与1)相同功能的由其衍生的蛋白质；

3)与1)具有95％以上同一性且与1)相同功能的蛋白质。

4.根据权利要求1-3中任一所述的重组菌，其特征在于：

所述重组菌为在含有薯蓣皂素合成路径相关基因的底盘酵母菌中进行所述1)和如下2)的改造，得到的重组菌：

2)提高所述底盘酿酒酵母的基因组中甾醇26位羟化酶基因VcCYP94N、甾醇16，22双羟氧化酶基因DGCYP90G、所述甾体22位羟化酶基因的表达。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于：

所述提高底盘酿酒酵母的基因组中甾醇26位羟化酶基因VcCYP94N、甾醇16，22双羟氧化酶基因DGCYP90G、所述甾体22位羟化酶基因的表达为将所述甾醇26位还原酶基因VcCYP94N的表达盒、所述甾醇16，22双羟氧化酶基因DGCYP90G的表达盒、所述甾体22位羟化酶基因的表达盒整合到所述含有tHMG1和Lys2基因的酿酒酵母基因组中得到；

所述VcCYP94N的表达盒包括TEF1启动子、来源于山藜芦的VcCYP94N基因和CYC1终止子；

所述DGCYP90G的表达盒包括TDH3启动子、盾叶薯蓣来源的DGCYP90G基因和TPI1终止子；

所述甾体22位羟化酶基因的表达盒包括PGK1启动子、山藜芦来源的VcCYP90B27基因和ADH1终止子。

6.根据权利要求4或5所述的重组菌，其特征在于：

所述重组菌为在含有薯蓣皂素合成路径相关基因的底盘酵母菌中进行所述1)、2)和如下3)的改造，得到的重组菌：

3)使所述底盘酿酒酵母中以质粒的形式高拷贝表达所述甾醇16，22双羟氧化酶基因DGCYP90G。