[发明专利]分离测定3-氨基-4-亚氨基利福霉素S及有关杂质的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定3‑氨基‑4‑亚氨基利福霉素S及其有关杂质的方法。方法中采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；相关杂质包括3‑氨基利福霉素S、3‑溴利福霉素S、利福霉素S、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D中的一种或多种；流动相A为乙腈和甲醇；流动相B为磷酸盐缓冲液。本发明的方法能同时分离测定3‑氨基利福霉素S、3‑溴利福霉素S、利福霉素S、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D；能准确地对3‑氨基‑4‑亚氨基利福霉素S原料药的质量进行控制，并最终确保产品的安全有效。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及到一种原料药利福布汀中间体3-氨基 -4-亚氨基利福霉素S及有关物质的分离测定方法。

背景技术

3-氨基4亚氨基利福霉素S具有很高的抗菌活性，是许多利福霉素衍生物 (如利福布汀)合成中的重要中间体。目前，主要的合成方法是以3-卤代利福霉素S或SV为原料合成，经卤代反应、硝化反应、还原反应、氧化反应、氨化反应得到。在这一系列反应过程中，会产生各种化合物，最终有一部分会残留于3-氨基4亚氨基利福霉素S中即杂质。因此，3-氨基4亚氨基利福霉素S的质量优劣是药物利福布汀质量保证的关键因素。

在药物分析中，所称的“有关物质”是指特定药物中不是主要组成物，但与成份相关的物质。在药物合成过程中，起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等，都有可能产生有关的物质。国内外对药物的研究，可允许含有一定限量的无害或低毒性的有关物质，但对毒性较大，能危害人体健康的、无效的或者能影响药物稳定性的有关物质则必须严格控制。因此，有关物质检测是控制药品质量的重要指标。

目前，美国药典USP版、欧洲药典EP、中国药典均未查询到3-氨基4-亚氨基利福霉素S的有关物质的测定方法。因此开发一种能够有效分离和测定3- 氨基4-亚氨基利福霉素S及其有关杂质的方法，很有意义。

发明内容

有鉴于此，本发明目的之一是提供一种分离3-氨基-4-亚氨基利福霉素S 及有关杂质的方法，有效将主药和各有关物质进行分离。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

分离3-氨基-4-亚氨基利福霉素S及有关杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A、流动相B进行梯度洗脱，将所述3-氨基-4-亚氨基利福霉素S及其有关杂质进行分离；所述相关杂质为3-氨基利福霉素S、3-溴利福霉素S、利福霉素S、杂质A、杂质B、杂质 C、杂质D中的一种或几种；所述3-氨基-4-亚氨基利福霉素S、相关杂质的结构式具体如下：

在选定本发明流动相之前，还采用了其他流动相，甲醇-水，乙腈-水，乙腈-磷酸二氢钠，有保留，但有拖尾且与杂质分析效果不佳。采用乙腈-磷酸二氢钾(pH调为7.0)，有保留，但是分离效果不理想。经过反复试验，综合考虑选用磷酸缓冲盐和有机溶剂的混合物作为流动相。

所述流动相A为有机溶剂；所述流动相B为磷酸盐缓冲液与有机溶剂的混合物。

进一步，所述的流动相A所选有机溶剂为甲醇、乙腈和乙醇中的一种或者两种，优选溶剂为乙腈和甲醇。

进一步，所述的流动相A中乙腈和甲醇的体积比为500～950∶50～500，优选体积比为900∶100。

进一步，所述的流动相B所选磷酸盐缓冲液为包括磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵中的一种或多种的溶液，优选磷酸盐为磷酸二氢铵。

进一步，所述磷酸盐溶液的浓度为0.01mol/L～0.2mol/L，优选的磷酸盐溶液的浓度为0.1mol/L。

进一步，所述磷酸盐溶液的pH值为2.5～10，优选pH值为5～9。