[发明专利]一种氘代犬尿氨酸及其在多肽中氨基酸构型分析中的应用

权利要求书

1.一种氘代犬尿氨酸，其特征在于，其结构式(1)、(2)为

2.一种如权利要求1所述的氘代犬尿氨酸的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤S1、加热水解：将L-犬尿氨酸(3)溶解于氘代盐酸重水溶液中，浓度为0.5mg/mL-20mg/mL，充氮密封，加热后得到第一混合溶液；

步骤S2、所述第一混合溶液经液相色谱进行纯化，收集氘代犬尿氨酸馏分，冻干，得微黄色粉末状氘代犬尿氨酸；

所述液相色谱的具体操作条件为：采用十八烷基键合硅胶反相色谱柱，流动相A为0.01-1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈或甲醇，流动相A：流动相B＝40:60-10:90(v/v)，流速设定为0.5-2mL/min，柱温为25-40℃，进样量为10-100μL，吸收波长为190-280nm。

3.根据权利要求2中所述的制备方法，其特征在于，所述氘代盐酸重水溶液的摩尔浓度为4-10mol/L。

4.根据权利要求2中所述的制备方法，其特征在于，所述加热的温度为85℃-130℃，所述加热的时间为5h-24h。

5.一种达托霉素中犬尿氨酸构型的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤A1、手性Marfey’s试剂衍生：

取达托霉素供试品溶液和对照品溶液，分别置于液相进样瓶中，采用手性Marfey’s试剂溶液对所述达托霉素供试品溶液和对照品溶液进行衍生化反应，得到衍生化后的供试品溶液和对照品溶液；

步骤A2：将所述衍生化后的对照品溶液和供试品溶液，经高效液相色谱-质谱分析；

所述对照品溶液包括L-犬尿氨酸溶液、D-犬尿氨酸溶液和氘代犬尿氨酸溶液，所述氘代犬尿氨酸溶液包括如权利要求1-4任一项所述的氘代犬尿氨酸；

步骤A1中，还包括以下步骤：

步骤A11、所述达托霉素供试品溶液的制备方法：

将达托霉素溶解于氘代盐酸的重水溶液中，达托霉素的浓度为0.5-5mg/mL，充氮密封，加热水解，得到水解溶液，所述水解溶液放冷至室温，加4-8mol/L氢氧化钠溶液适量，中和至中性，得到达托霉素供试品溶液；

步骤A12、所述对照品溶液的制备方法：

将D-犬尿氨酸、L-犬尿氨酸和所述氘代犬尿氨酸，分别溶解于氘代盐酸的重水溶液中，得到对照品溶液；所述对照品溶液的浓度为0.3-5mg/mL。

6.根据权利要求5中所述的检测方法，其特征在于，所述达托霉素的结构式(4)如下，其13位氨基酸为L-犬尿氨酸

7.根据权利要求5中所述的检测方法，其特征在于，步骤A1中，还包括以下步骤：

步骤A13、所述手性Marfey’s试剂溶液的制备方法：

将所述Marfey’s试剂溶于溶剂，得到所述手性Marfey’s试剂溶液，浓度为0.5-4mg/mL。

8.根据权利要求5中所述的检测方法，其特征在于，步骤A11中，所述加热的温度为100-140℃，所述加热的时间为5-24h。

9.根据权利要求7中所述的检测方法，其特征在于，步骤A13中，所述的Marfey’s试剂为Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L/D-缬氨酰胺、Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L/D-丙氨酰胺、Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L/D-亮氨酰胺和Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基)-L/D-苯丙氨酰中的一种。

10.根据权利要求7中所述的检测方法，其特征在于，步骤A13中，所述的Marfey’s试剂的溶剂为二甲亚砜、丙酮或乙醇。