[发明专利]基于纳米颗粒的活细胞表面改造方法及其使用的纳米颗粒

权利要求书

1.一种基于纳米颗粒的活细胞表面改造方法，包括如下步骤：

步骤1、制备纳米颗粒，使其表面含有-NH₂、-SH或-COOH；

步骤2、将步骤1制得的纳米颗粒对一种或多种生物活性物质进行负载，获得负载有一种或多种生物活性物质的纳米颗粒；

步骤3、采用活性PEG对步骤2中的纳米颗粒表面进行修饰，使纳米颗粒表面带有马来酰亚胺或者活性酯基团，获得活化了的纳米颗粒，其中，所述活性PEG为NHS-PEG-MAL或者CHO-PEG-MAL或者为EDC和NH₂-PEG-MAL；

步骤4、收集处于对数生长期的细胞并培养，加入步骤3中活化了的纳米颗粒进行孵育，除去未反应的纳米颗粒，获得与细胞连接了的纳米颗粒；

步骤5、采用PEG-SH或PEG-NH₂封闭与细胞连接了的纳米颗粒表面的活性基团，得到载有生物活性物质的表面改造了的活细胞；

步骤4中的具体步骤如下：收集处于对数生长期的细胞，并铺于24孔板中，每孔1 mL，细胞密度为1×10⁴个/孔—1×10⁸个/孔，采用无血清培养基37℃下培养；之后加入步骤3中活化了的纳米颗粒，使其终浓度为3.125-200 μg/mL，之后在4℃孵育10-120 min，每15 min轻轻摇晃一次，之后用PBS洗涤细胞去除未反应的纳米颗粒，并最终获得与细胞连接了的纳米颗粒；

步骤5中的具体步骤如下：采用PEG-SH或PEG-NH₂封闭与细胞连接了的纳米颗粒表面的活性基团：将PEG-SH或PEG-NH₂溶解于无血清培养基中使其浓度为0.125-2 mg/ ml，加入步骤4的孔板中并在4℃与细胞孵育10-120 min，之后用PBS洗涤去除未反应的PEG-SH或PEG-NH₂，得到载有生物活性物质的表面改造了的活细胞；

所述步骤1中的纳米颗粒为具有放射状孔径的氧化硅、聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒、沸石咪唑类骨架材料ZIF-8纳米颗粒、聚乳酸PLA纳米颗粒、聚苯乙烯球、金属有机骨架或共价有机骨架中的一种, 所述纳米颗粒的粒径小于500 nm；

所述步骤2中的生物活性物质为细胞因子、酶、蛋白质、细胞集落刺激因子中的一种或几种的组合；其中，所述细胞因子为： IL-12、IL-2、IL-4、IL-13，所述的酶为：胎盘葡萄糖脑苷脂酶、磷酸肌酸激酶，所述的蛋白质为：β-乳球蛋白、索马鲁肽、胰岛素，所述的细胞集落刺激因子为：GM-CSF、M-CSF；

步骤4中所述的细胞种类为树突状细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、干细胞、红细胞、单核细胞；所述步骤4还包括对树突状细胞、巨噬细胞进行活化预处理，细胞活化预处理步骤如下：将步骤1所得的纳米颗粒负载有抗原OVA，然后再与所述细胞共同孵育，获得活化了的细胞，使得细胞就不吞噬纳米颗粒。